pcr实验室(相关资料)

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1、PCR：即聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction），利用DNA在体外95°C时解旋（变性），55°C时引物与单链按碱基互补配对的原则结合（退火），再调温度至72°C左右，DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖（5L31）的方向合成互补链（延伸）。PCR仪实际就是一个温控设备，能在95°C，55°C，72°C之间很好地进行温度控制。根据DNA扩增的目的和检测的标准可以将PCR仪分为：普通PCR仪，梯度PCR仪，原位PCR仪，实时荧光定量PCR仪等几类,普通PCR仪：一般把一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪，称之为普通PCR仪，也就

2、是传统的PCR仪。如果要用它做不M的退火温度则需要多次运行。普通PCR仪主要应川于科研、教学、临床匡学、检验、检疫等。如:启步巳SW-2P，BSW-3P，ABI2720型梯度PCR仪：PCR反应能否成功，退火温度足关键，梯度PCR仪每个孔的温度4以在指定范围内按照梯度没S,根据结果，一步就可以摸索出蛣适反应条件。一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件（通常12种温度梯度）的称之为梯度PCR仪。不同的DNA片段其最适合的退火温度不M，通过设置一系列的梯度退火温度进行扩增，从而一•次性PCR扩增就可以筛选出表达景商的最适合返火温度进行奋效的扩增。梯度

3、PCR仪主要用于研究未知DNA退火温度的扩增，这样既节约时间，也节约成木。在不设置梯度的情况K亦可当做普通的PCR用。梯度PCR仪多应川于分子生物学、医学、食品工业、司法科学、生物技术、环境科学、微生物学、临床诊断、流行病学、遗传学、基冈芯片、基因检测、基冈克隆、基因表达等领域以聚合酶链式反应（PicymeraseChainReaction，PCR）为特征的、以检测DNA/RNA为R的的各种病原体检测及菇因分析。如:启步BSW-2T,BSW-3T,ABI9700,ABIVeriti,Bio-RadT100型原位PCR仪：PCR是提取细胞或组织中的DNA进行

4、葙因扩増反应,而原位PCR是保持细胞或组织的完整性，使PCR反应体系滲透到组织和细胞中，在细胞的靶DNA所在的位置上进行基因扩婚。不但可以检测到靶DNA,而且还可以了解靶DNA存在于何种细胞屮，更奋利于探讨靶DNA与细胞之间的关系。原位PCR仪主要应川于：（1）检测外源性基因片段，提离检出率，集中在病毒感染的检查上，如HIV、HPV、HBV、CMV等；（2）观察病原体在体内分布规律；（3）内源性基因片段，如人体的单菽因病、重组®因、易位的染色体、lg的mRNA片段、癌基因片段等；（4）检测导入某因；（5）遗传病®因检测如P—地中海贫血。实时荧光定量PCR仪

5、：在普通PCR仪设计基础上增加荧光信号采集系统和计算机分析处理系统，形成了具有荧光定量功能的PCR仪器。其PCR扩增原理和普通PCR扩增原理相同，在PCR扩增时加入的引物是利用同位素、荧光素等进行标记，使用引物和荧光探针M吋与模板特异性结合扩增。扩增的结果通过荧光信号采集系统实时采集信号连接输送到计算机分析处理系统，得出量化的实时结果输岀。荧光定量PCR仪有单通道，双通道和多通道之分。当只用一种荧光探针标记的时候，选用单通道；有多种荧光标记的时候使用多通道。单通道也讨以检测多荧光的称记和n的基w表达产物，因为一次只能检测一种FI的难因的扩增跫，需多次扩增j

6、能检测完不M的n的基因片段的量。多通道利于做多重PCR，实现一次检测多种0的基闪的功能。荧光定景PCR仪主要应用于临床医学检测、生物医药研发、食品行业、科研院校等。荧光定景检测技术在临床诊断方而很多，主耍集中迕各种病原体引起疾病的临床诊断，如肝炎类疾病、性病、与优生优育ffl关的疾病以及肺结核等等。通道：channel指的是针对毎一种荧光的检测器，比如你在一个管屮做多个颜色，针对多个靶基因。每个颜色諾耍一个检测器来检测荧光信号的强弱，每一个针对不M颜色的检测器，就是一个通道。在使用有些厂家5通道的荧光定量仪吋，为Y确保实验结果的精确性和准确性都要在实验屮使

7、用ROX（一种荧光染料，ROX是作为内参的，即参照和校正实验结果。在ABI的机器里显示为红色的水T•线。如果你的扩增线在刚开始的时候就高于ROX证明杏基因组DNA污染。）或专用的Referencedye，这些荧光染料都必须单独使用一个检测通道。这样以来，真正能检测多重PCR荧光信号的科效通道以有4个，而且使用校正染料可能会增加后期的使用成本。有的荧光定量PCR的检测通道是从为A已厂家的专用的荧光染料或试剂开放的，有效检测通道也绝非像宣传资料中宣称的那么多。选择单通道实验还是多通道实验？这是耍根据实验需要来选择的，如果有一个、两个或是三个基因要进行比较，并用

8、看家基因进行对照，可以考虑选择多通道实验。多通道实验的好处适可以消