凋亡相关基因survivin及caspase-3 mrna在膀胱移行细胞癌中的表

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1、凋亡相关基因Survivin及Caspase?3mRNA在膀胱移行细胞癌中的表管维，周四维，王勤章，叶章群【摘要】目的探讨凋亡相关基因survivin及Caspase?3mRNA的表达与膀胱移行细胞癌发生及发展的关系。方法应用逆转录?聚合酶链式反应(RT?PCR)检测33例膀胱移行细胞癌组织中survivin和Caspase?3mRNA表达的情况，结合临床资料进行分析。结果93.9%(31/33)的肿瘤组织可检测到survivinmRNA表达，而对照组全部阴性表达，二者有统计学意义；81.8%(27/33)的肿瘤标本可检出Ca

2、spase?3mRNA，而对照组中检出率为80%(8/10)，实验组与对照组间无明显差异。在III级膀胱移行细胞癌中survivinmRNA的表达强度较I级为高，二者间有统计学意义(P<0.05)。survivin和Caspase?3的表达与肿瘤的临床分期无关(P>0.05)。结论survivinmRNA在膀胱移行细胞癌中有特异性表达，其高表达提示肿瘤分化不良。阻断suvivinmRNA的表达可能为膀胱肿瘤的治疗提供新的途径。【关键词】膀胱癌　　近年来，通过肿瘤的基础研究认为凋亡的下调是肿瘤发生学中的中心事件。su

3、rvivin是凋亡抑制基因家族的成员之一，在多数人类常见恶性肿瘤中可观察到survivin的过表达，可能与肿瘤细胞逃避凋亡以及有丝分裂的异常有关[1?4]。前期研究已经探讨了survivin蛋白在膀胱移行细胞癌中表达的情况，但是survivin表达的上调到底是在蛋白水平还是在RNA水平尚不清楚。Caspase?3作为survivin的直接抑制对象，其mRNA水平在膀胱肿瘤中有无变化亦需进一步研究。本实验采用了RT?PCR方法对33例膀胱移行细胞癌患者的组织标本进行检测，以评价survivin以及Caspase?3mRNA的表达

4、在膀胱移行细胞癌生物学行为中的地位和作用。　　1材料与方法　　1.1临床资料收集我院1999年1月至2003年3月33例膀胱癌患者手术的新鲜组织标本，手术后病理证实均为膀胱移行细胞癌。其中男27例，女6例，年龄35-72岁(平均57.3岁)。另选择10例癌旁正常膀胱黏膜作为阴性对照。膀胱癌按标准分期：Ta-T1期13例，T2-T4期18例。所有标本均冻存于-70℃备用。　　1.2实验方法采用RT?PCR法。RNA提取试剂盒和DEPC为GibcoBRL公司产品。逆转录试剂盒为Takara公司产品。无RNA酶水自制，另备氯仿、异丙

5、醇、75%(体积分数)乙醇等。其他试剂均为国产分析醇或进口分装。分子量标记分别为DL2000(TaKaRa公司)和PCRladder。Survivin引物：5′?GGACCACCGCATCTCTACAT(上游)；5′?GCACTTTCTTCGCAGTTTCC(下游)，预扩增片断为338bp。Caspase3引物：5′?CGTGTATTGTGTCCATGCTCAC(上游)；5′?CCATCATTGACAGTTACTTGCTCC(下游)，预扩增片断为271bp；内参GAPDH引物：5′?GGGGAGCCAAAAGGGTCATCAT

6、CT(上游)；5′?GAGGGGCCATCCACAGTCTTCT(下游)，预扩增片断为235bp。Survivin及Caspase?3引物经primer软件比对，符合要求。所有引物均由上海生物工程公司合成(5OD值)。实验步骤按说明书进行。10g/L琼脂糖凝胶电泳，拍照。用SQ9636型扫描系统扫描，HPIAS?1000图像分析系统检测各组目的基因及GAPDH基因(内参)的积分吸光度值，以二者的比值代表各组mRNA的表达量。　　1.3统计分析使用SPSS10.0软件包统计分析，实验组与对照组的比较采用χ2检验，各实验组相对平均

7、表达水平间的比较采用方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义。　　2结果　　2.1SurvivinmRNA在膀胱移行细胞癌中的表达本组共33例膀胱移行细胞癌标本中，有31例survivinmRNA表达阳性，阳性率为93.9%(31/33)，而对照组全部表达阴性，两者间有统计学意义(P<0.05，图1)。以GAPDH作内参进行半定量分析后发现，survivinmRNA的表达强度在Ⅰ级和Ⅲ级膀胱移行细胞癌之间的差异有统计学意义(P<0.05)，但是与膀胱肿瘤的分期无明显相关性(表1)。　　图1survivinm

8、RNA在膀胱移行细胞癌中的表达（略）　　表1Survivin及Caspase?3mRNA在膀胱移行细胞癌中的表达（略）　　*P<0.05vs.Ⅰ级　　2.2Caspase?3mRNA在膀胱移行细胞癌中的表达本组33例膀胱移行细胞癌标本中，有31例Caspase?3mRN