创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织脂多糖受体cd14 mrna、核因子

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1、创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织脂多糖受体CD14mRNA、核因子：郑阿迈，陈玉熹，李萌芳，梁欢，卢中秋【摘要】目的:探讨创伤弧菌（Vibriovulnificus，VV）脓毒症大鼠肺组织脂多糖受体CD14mRNA、核因子-κB（NF-κB）基因的表达及其动态变化。方法:SD雄性大鼠60只，随机分为6组，每组10只。第1组：正常对照组（NC组）；第2～6组为VV组:予大鼠下肢皮下注射VV，造成VV脓毒症模型，以注射VV后2、6、9、12、16h各时间点分别为2～6组。取各组大鼠部分肺组织，用RT-PCR法测定大鼠肺组织不同时间点CD14mRNA、NF-κBmRNA的表达。结果:NC组大鼠肺组织有

2、少量CD14、NF-κBmRNA表达，分别为0.392±0.056和0.366±0.179。感染VV后大鼠肺组织CD14mRNA表达增加，2、6、9、12、16h的表达量分别为0.976±0.180，1.148±0.218，1.026±0.033，0.988±0.129，0.970±0.125。大鼠肺组织NF-κBmRNA表达量也明显增加，2、6、9、12、16h的表达量分别为0.763±0.215，1.100±0.101，1.068±0.174，1.057±0.076和0.800±0.205。与NC组相比，二者均明显升高（P＜0.05）。结论:VV脓毒症大鼠肺组织CD14、NF-κB的

3、基因表达水平在脓毒症中明显升高，其与脓毒症的发生、发展密切相关，动态监测其改变对VV脓毒症发病过程具有一定的预警意义。【关键词】创伤弧菌；脓毒症；脂多糖受体CD14；核因子-κB；基因Abstract:Objective:TodetecttheGeneexpressionandthedynamicchangeofpulmonarylipopolysaccharidereceptorCD14andNF-κBinratsaleSprague-Daly.Thefirstgroupedcontrolgroup.VVgroupsincludethesecondtosixthgroupakeVVse

4、psismodel.Samplescontrolgroupandthesecondgrouptothesixthgroupatthetimepointof2，6，9，12，16hafterinjectionrespectively，thegenesofpulmonarylipopolysaccharidereceptorCD14andNF-κBinrats'lungeasuredinthedifferenttimebythemethodofRT-PCR.Results:TheGeneexpressionofpulmonarylipopolysaccharidereceptorCD14an

5、dNF-κBinthecontrolgrouponarylipopolysaccharidereceptorCD14andNF-κBelevationareassociatedentofVVsepsis.MonitoringthechangeoftheGeneexpressionofpulmonarylipopolysaccharidereceptorCD14andNF-κBinthelunghavethebenefitofmasteringtheVVsepsisprogress.Keyl备用。1.3实验材料Trizol试剂，逆转录试剂盒均由Invitrogen公司提供。PCR试剂盒由F

6、ermentas公司提供。RatCD14引物（引物序列：Foracia公司提供。1.4实验方法1.4.1建立大鼠VV脓毒症模型。SD雄性大鼠60只，购来后饲养1周以上，实验前禁食12h，自由进水。随机分为6组，每组10只。第1组：正常对照组（NC组），麻醉后处死。第2～6组：VV脓毒症组（VV组），予双下肢皮下注射VV，细菌浓度为9×108cfu/ml，剂量为1ml/100g，制作VV脓毒症模型。大鼠脓毒症模型诊断标准参照文献[4]。VV组大鼠分别在注射创伤弧菌后2、6、9、12、16h各时间点分别为2～6组，麻醉后处死。无菌取部分肺组织，用4℃生理盐水冲洗后迅速置于液氮中保存待用。1.

7、4.2RT-PCR法测定大鼠肺组织CD14、NF-κB的mRNA表达。取冻存大鼠肺组织约50mg，按Trizol说明书，提取大鼠肺组织总RNA。用分光光度计检测总RNA的浓度和纯度，要求OD260/OD280比值在1.8～2.0之间。根据逆转录试剂盒说明书进行逆转录反应。用1.5%琼脂糖凝进行电泳。同时加合适的DNAladder。采用凝胶成像分析系统观察电泳结果，并用QuantityOne软件进行凝胶扫描分析。以目的基因/β-act