生物技术制药概论

《生物技术制药概论》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、1、基因工程制药的主要步骤(1)从供体细胞中分离出基因DNA,用限制性核酸内切酶分别将外源DNA和载体分子切开(2)用DNA连接酶将含有目的基因的DNA片段接到载体分子上，形成重组的DNA分子(3)将人工重组的DNA分子导入它们能够正常复制的受体细胞中(4)短时间培养转化细胞，以扩增DNA重组分子或使其整合到宿主细胞的基因组屮(5)筛选和鉴定转化细胞，获得使外源基因高效稳定表达的基因工程菌或细胞(6)将基因工程菌发酵，收获有0的蛋白的发酵液，采用一系列分离纯化手段从发酵液中获得高纯度的目的产物(7)对目的蛋白进行过滤除菌，对某些要求更为严格的产物还需

2、除热源等处理(8)对目的蛋白进行制剂研究，并进行半成品或成品检测，检测合格后进行包装2、目的基因的制备(1)从基因组中直接分离a密度梯度离心法b单链酶法c分子杂交法d限制性内切酶降解法(2)通过RNA合成DNA(3)基因的化学合成(4)聚合酶链反应法3、载体的定义及条件定义：能将外源目的DNA导入受体细胞，并能自我复制和增殖的工具称为载体条件：1能自我制2具有多个限制酶的识别位点3具有遗传表型或筛选标记4有足够的容量以容纳外源DNA片段5可导入受体细胞4、什么是限制性内切核酸酶能识别DNA链特定核冇酸序列，并能切割的酶II型限制酶的特点a、识别序列平

3、齐末端4-7个核苷酸同一位点断裂回续序列：正续反续一样b、酶切方式粘性末端：断裂位置交错5、目的基与载体DNA的连接方式1同种限制性内切酶产物之间的连接2同尾酶产生的粘性末端连接3不同末端结构的连接4平末端的DNA连接6、重组基导入受体cell的方式1转化(受体cell处于感受器)2转导(供体cell—受体cellor目的基因一受体cell)3转染目的gene-*真核genea、Ca3(PO4)2-DNA转染法b、原生质体融合c、脂质体融合d、电穿孔法e、显微注射f、基因枪法g、病毒感染法7、重组子的筛选(1)凝胶电泳法目的基因+载体一重组子检测方法

4、：裂解宿主cell重组子与空载体电泳比较对象：较大的目的蛋白(2)限制性内切酶分析法(3)印迹杂交法探针：与DNA/RNA杂交的核苷酸序列用放射性同位素/生物素标记(4)PCR法(5)DNA序列分析法鉴定方法检测对象探针原位杂交DNADNA点杂交DNADNASouthern杂交DNADNANorthern杂交RNADNAWestern杂交蛋白质(抗原)抗体8、基因工程菌在传代过程中质粒不稳定的原(1)分裂不稳定：分裂时子代不含质粒(2)结构不稳定：发生缺失、重排、修饰等提高质粒稳定性的方法(1)选择合适的宿主细胞(2)选择合适的载体(质粒)(3)加入

5、选择性压力(抑制/排除质粒丢失菌的生长)(4)分阶段培养.•a、生长阶段：阻遏外源gene表达b、表达阶段：去阻遏(5)控制培养条件9、动物细胞培养的营养条件(1)足够的营养(包括糖、氨基酸、维生素、无机盐等)(2)—定的生长环境(合适的温度、PH及无菌条件〉10、培养的分类及特点天然培养基(动物体液或组织提取物)合成培养基(人工模拟天然培养基的主要成分)无血清培养基(合成培养基+添加剂)11、动物细胞融合技术的基本过程(1)细胞的准备(2)诱导融合(3)杂交细胞的筛选(4)杂交细胞克隆12、微载体培养的特点(1)细胞附着表面积增大(2)细胞生忪环境

6、均一，条件容易控制(1)取样及细胞计数简单(4)细胞与培养液易于分离(1)大规模培养只耑对微生物发酵罐或气升式层培养系统稍加改进(2)适合于培养原代细胞、二倍体细胞株以及基因重组细胞13、影响原生质体融合的因素幽龄、培养及成分、PEG、外界因素14、发酵方式的分类(1)固体发酵(曲法发酵)(2)液体发酵：a分批发酵b补料分批发酵c连续发酵15、溶氧异常下降的原因：(1)设备或工艺故障或变化(2)污染好养杂菌(3)菌体代谢异常引起溶氧异常上升的因素(1)设备故障(2)感染烈性噬菌体(生产菌株死亡)(3)菌体代谢受到抑制溶氧的控制(1)调节通气速率和搅拌

7、功率搅拌在提高Do中的作用A、空气打散成小气泡，气体接触面小B、液体径向运动，延长气泡在液体中的停留时间C、减少气泡周围液膜厚度，减少传质阻力(2)控制菌体浓度控制培养基浓度(3)其他方法(降温、补水、加表面活性剂)16、(1)什么是定化酶?指通过一定的技术，将提纯化的酶制剂固定或限制在一定的相对密闭空间里，使之不但能够连续地进行反应，而且反应后的酶又可以反复使用(2)制定固定化酶的方法A、载体结合法物理吸附法(利用载体A外表面性质，将酶吸附)离子结合法(通过离子键结合酶与载体交联的固定法)共价结合法(通过共价键结合酶与载体固定方法)B、交联法利用双

8、功能或多功能试剂，直接与细胞表而的各种反应基团反应，使其彼此共价交联形成网状结构，从而同定细胞C、包埋法将微