头孢克肟颗粒微生物限度检查的方法学验证

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1、头孢克肟颗粒微生物限度检查的方法学验证刘佳（广东省梅州市盘品药品检验所广东梅州514000）【摘要】目的建立头孢克肟颗粒的微生物限度检查方法。方法测定头孢克肟颗粒对5种试验菌株的回收率，并进行控制菌的检查。结果5种试验菌株的回收率均高于70%以上，控制菌阳性生长良好。结论通过试验证明该方法有效可行，可用于该品种的微牛.物限度检查。【关键词】头孢克肟颗粒微生物限度检查回收率【中图分类号】R927.ll【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）32-0051-02药品在生产、储存、流通等环节

2、都可能受微生物污染，被污染药品对人体的生命安全存在极大的隐患，而采用合适的方法进行药品微生物检查，可准确地反映药品受污染的程度，并保证人民大众用药安全。头孢克肟为第三代口服头孢菌素，通过抑制细菌细胞壁合成而起杀菌作用，对多数β内酰胺酶稳定，许多产青霉素酶和头孢菌素酶菌株仍对木品敏感。近年来的研究表明，头孢克肟在治疗儿童上呼吸道感染，儿童急性化脓性中耳乳突炎，小儿细菌性肠炎有较好疗效。木试验的供试品溶液经低速离心处理后，拟采用薄膜过滤法及常规法进行头孢克肟颗粒的微生物限度检查，并根据《中岡药典》

3、2010年版验证试验要求进行方法学验证。1试验材料1.1仪器设备蒸汽灭菌器（DSX-280KB24,上海申安医疗器械厂）；电热鼓风干燥箱［（GF-9030（A）,上海迈捷试验设备］;霉菌培养箱（MJX-150,上海中贤恒温设备厂）；生化培养箱（SPX-80,上海海向仪器设备厂）;离心机（TDZ6B-WS,上海卢湘仪离心机仪器有限公司）；孔径为0.45μm±0.2μm醋酸纤维素滤膜（上海医药工业研究所，亚东分离器材厂）；STV2开放式薄膜过滤器（浙江宁海白石药检器厂）。1.2菌种

4、大肠埃希菌［CMCC（B）44102］、金黄色葡萄球菌［CMCC（B）26003］、枯草芽孢杆菌［CMCC(B)63501］、白色念珠菌［CMCC(F)98001］和黑曲霉［CMCC(F)98003］,均由中国药品生物制品检定所提供。1.3培养基及试剂营养琼脂培养基，玫瑰红琼脂培养基，营养肉汤培养基，蛋白膝(均由中国药品生物制品检定所监制)，β-内醜胺酶(购于上海瑞齐生物科技有限公司)。1.4稀释剂pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.1%蛋白胨水、0.05%(v/v)聚山梨酯80的0.9%

5、无菌氯化钠溶液均自配。1.5试药头孢克肟颗粒A、B、C三个厂家，分别为深圳致君制药有限公司、湖南紫光古汉南岳制药有限公司、广州白云山制药总厂，批号分别为B20120323、20120316、2120069(以下用数字1、2、3表示，规格50mg/袋。)2实验方法2.1菌液制备接种大肠埃希菌，金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤中，30〜35°C培养18〜24h,用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成每lmL含50〜lOOcfu的菌悬液。接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，23〜28°C培

6、养24〜48h,用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成每1ml含50〜lOOcfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物到改良马丁琼脂培养基斜面上，培养5〜7d，加入5mL0.05%(v/v)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，吸出孢子菌液至火菌试管内，用含0.05%(v/v)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液将菌液稀释至每lml含50〜lOOcfu的菌悬液。2.2供试液制备取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml置匀浆罐，制成1:10的溶液，将1:10的溶液离心5分钟(500转

7、/分钟)，上清液为1:10的供试液。2.3常规法取1:10供试液lml注入平皿内，平行制备两个，倾注冷却至45°C的相应琼脂培养基(细菌计数用培养基为营养琼脂，霉菌、酵母菌计数用培养基为玫瑰红钠琼脂培养基)15〜20mL，摇匀，凝固后，将平板倒置于规定的温度培养至规定的吋间(细菌于30〜35°C培养3d,霉菌、酵母菌于23〜28°C培养5d)，做菌落计数。2.5细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证2.5.1验证方法（1）试验组根据上述两种方法的差异，加入各种试验菌的方法不同。a.按常规法，取1:10供试液1m

8、l注入平皿后，于每皿中加入50〜lOOcfu试验菌，每种试验菌各平行制备两份。b.采用薄膜过滤法，各试验菌50〜lOOcfu在最后一次的冲洗液中加入，过滤，各平行制备两份。（2）菌液组测定所加入的每种试验菌数（3）供试品对照组分别取1:10供试液按上述两种方法操作，用于测定供试品本底菌数。（4）稀释剂对照组供试液需经薄膜过滤特殊处理时，应增加稀释剂对照组，以考察供试液制备过程中微生物受影响的程度。试验吋，用相应的稀释液替代供试品，分别加入各