海水浸泡对失血性休克大鼠肠粘膜上皮细胞线粒体功能的影响研究

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1、海水浸泡对失血性休克大鼠肠粘膜上皮细胞线粒体功能的影响研究-->　　提　要:目的　研究海水浸泡对失血性休克大鼠小肠粘膜上皮细胞线粒体功能的影响。方法　采用雄性ethods　Taleitochondriatheintestinalmucosa.Cytochromesaa3,b,candc1andenergyproduc-tioninedfortheevaluationofthefunctionofrespiratorychainofthemitochondriainintestinalmucosa.　　Results　Thelevelsofcytochromesaa3,c

2、andc1andenergyproductioningroupBmersingcandamagethefunctionofmitochondriainintestinalmucosa.　　Keyorrhagicshock;intestinalmucosa;mitochondria肠上皮细胞是构成肠道粘膜屏障的主要成分,它具有增殖代谢旺盛、更新周期短等生理特点,对缺血缺氧极为敏感。创伤后小肠粘膜上皮细胞的大量坏死、凋亡导致细胞间的紧密连接丧失,肠屏障功能受损,细菌或内毒素可通过细胞间隙直接入血或淋巴循环,是不可逆休克和多器官功能衰竭的重要因素[1],在海水浸泡失血性休克的

3、病理演变过程中可能起重要作用。　　因此,我们在本实验中观察了海水浸泡对大鼠小肠粘膜上皮细胞线粒体呼吸链的影响,旨在从能量代谢的角度,阐明海水浸泡失血性休克大鼠肠粘膜上皮细胞损伤的可能机制。　　1　材料与方法1·1　实验动物及分组处理健康成年雄性AP)为40mmHg,维持1h,然后于室温(21℃)下继续观察5h后采集小肠标本进行检测;海水休克组大鼠放血至MAP为40mmHg,维持1h,然后将大鼠浸入海水池中(海盐质量分数为2.535%,水温为21℃),头部露于水面,观察5h后采集小肠标本;正常对照组不放血,不放入海水中,其它处理同前两组。　　1·2　肠粘膜上皮细胞线粒体分

4、离方法按改良的Lamrence和Davies方法进行[2]。　　1·3　细胞色素aa3、b、c和c1含量测定根据s方法改良而成[3]。　　1·4　ATP、ADP、AMP和能荷的测定采用高效液相法(HPLC)。样品制备:组织块称质量、匀浆(按20ml/mg加0.3mol/LHClO4);3000×g离心5min,取上清加等体积0.5mol/LKOH;3000×g离心5min,上清上机检测。　　色谱条件:采用阶形梯度洗脱,在15min内流动相B从20%升至100%,流速每分钟1ml;检测波长254nm;进样量25μl。能荷=(ATP+0.5ADP)/(ATP+ADP+AMP

5、)。　　1·5　统计学处理结果以-x±s表示,采用方差分析。　　2　结果2·1　海水浸泡对失血性休克大鼠小肠粘膜上皮细胞细胞色素aa3、b、c和c1的影响如表1所示,海水休克组小肠粘膜上皮细胞线粒体细胞色素aa3、c和c1均显著低于对照组和平原休克组;海水休克组小肠粘膜上皮细胞细胞色素b与平原休克组无显著差异,但显著低于正常对照组。　　2·2　海水浸泡对失血性休克大鼠小肠粘膜上皮细胞能荷的影响如表2所示海水休克组大鼠小肠粘膜上皮细胞能荷显著低于正常对照组和平原休克组,仅为正常对照组的59%和平原休克组的73%。　　3　讨论线粒体是细胞活动的主要供能场所,是物质代谢和能量

6、转化的中心站,细胞内80%以上的ATP在线粒体合成。当能源物质合成障碍,其后果是:①胞内各种耗能的生物反应中断;②氧自由基生成增加,氧化蛋白质、核酸和生物膜等;③膜电位降低丧失,离子泵功能受损,细胞膜对离子的通透性高,细胞肿胀坏死[4];④细胞大量凋亡[5]。正常情况下,肠粘膜上皮细胞的更新十分迅速,它对于能量供应的变化十分敏感。能量代谢障碍造成肠粘膜上皮细胞大量坏死、凋亡,肠屏障功能受损,是肠道细菌、内毒素移-->位的重要因素。　　小肠粘膜上皮细胞内细胞色素aa3、b、c和c1是同一呼吸链上的不同环节,只要一个环节出现问题就可能影响整条呼吸链的功能。和对照组比较,海水

7、休克组大鼠小肠粘膜上皮细胞细胞色素aa3、b、c和c1均出现明显丢失,说明膜上皮细胞内呼吸链可出现显著的功能障碍。同时实验结果显示海水休克组能荷明显下降,显著低于正常对照组和平原休克组,可见,海水浸泡失血性休克大鼠早期肠粘膜上皮细胞线粒体内能荷与呼吸链的变化是一致的。与平原休克组比较,海水休克组小肠粘膜上皮细胞线粒体细胞色素aa3、c和c1均显著降低,加重能量代谢障碍,使能荷下降。　　在海水浸泡条件下失血性休克大鼠伤情明显加重,低温、高渗、血液中高氯、高钾等因素均是造成伤情加重的致伤因素。由于肠道在失血性休克的病理演变过程中起重要作用,提