上矢状窦血栓形成动物模型制作新方法及体会

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1、上矢状窦血栓形成动物模型制作新方法及体会摘要：目的：建立一个稳定的，易复制的上矢状窦血栓形成(SSST)的动物模型。方法：将SD大鼠70只随机分为观察组(n=30),对照组(n=30),假手术组(n=30);大鼠脑静脉结扎与上矢状窦注入ActivatedCephaloplastinReagent相结合为观察组，传统的上矢状窦结扎方法为对照组。在术后6h、24h、72h分别进行神经功能缺损分级，测定脑水含量及HE染色。结果：观察组较对照组神经功能缺损严重，脑组织含水量明显增加，各组之间比较有统计学意义；其

2、病情发展更符合临床上矢状窦血栓形成病理改变及变化;结论：该造模方法模型成功稳定，易于复制。关键词：上矢状窦血栓形成;动物模型;神经功能缺损;脑水含量目前有关静脉窦血栓形成的动物模型制作的方法有多种多样，所选用的动物和栓塞方法也各不相同，目前所建立的各种脑静脉栓塞动物模型的研宄结果有较大的差异性和不可复制性。国内外至今仍没有一个较为公认的方案［1］。我们最近采用一种将大鼠脑静脉结扎与上矢状窦注入ActivatedCephaloplastinReagent相结合的方法，动物模型成功率高。1.材料与方法1.1

3、实验动物与分组健康雄性SD大鼠70只，鼠龄3-6个月，体重275-350g,由南华大学实验动物部提供。依照随机数字表分为：观察组：脑静脉（桥静脉）结扎与上矢状窦注入ActivatedCephaloplastinReagent相结合;对照组：单纯上矢状窦中后1/3段结扎，两组在术后6h、24h、72h再分3小组，每小组各10只;假手术组大鼠10只，在6h后取4只，24h、72h后各取3只。1.2动物模型的制备观察组和对照组的大鼠均在术前禁食、水，采用10%水合氯醛3.5ml/kg腹腔注射麻醉。麻醉成功后，

4、将大鼠俯卧位固定于脑立体定位仪上，头部备皮，依次使用碘酒酒精消毒，于颅顶正中作一约1.5cm矢状切口，切开皮肤及皮下组织至颅骨，皮瓣向左右两侧牵开，用高压消毒的干棉球轻轻擦除颅骨外膜。用电钻于后自前以矢状缝为轴，开一约0.5cm*0.3cm骨骨蜡止血，充分暴露SSS并保持硬脑膜完好。于上矢状窦中后1/3处结扎回流静脉（桥静脉），并用27号显微注射器穿刺向SSS（中后1/3段）腔内缓慢注射ActivatedCephaloplastinReagent,l/2h后血栓基本形成，观察10分钟，确定无活动性出血。

5、干棉球清洁伤口，骨蜡封闭骨缝合头皮，酒精消毒。苦味酸标记，大鼠术后保温，待其苏醒后送回动物饲养室饲养。对照组开骨窗暴露SSS并保持硬脑膜完好，单纯做上矢状窦中后1/3处结扎。假手术组仅开骨窗暴露SSS并保持硬脑膜完好，不做栓塞，确定无活动性出血后骨蜡封闭骨缝合头皮，酒精消毒术后处理：术后两组大鼠均采用自然复温（25-26°C室温）。所有动物的切口均按如下程序处理：先用骨蜡封闭骨窗，然后用庆大霉素生理盐水（160u/ml）冲洗头皮切口，缝合，再用70%酒精擦洗伤口。术毕所有动物均腹腔内注射庆大霉素生理盐水

6、6ml/g，旨在预防感染和补充液体，在大鼠身上用彩笔标记编号，并置于接食物与水源的鼠笼中自由饲养。1.3神经功能缺损分级动物造模后按如下标准进行评分，判断造模成功与否，物一般情况：观察动物精神、意识状态、饮食、二便、肌力、肌张力和死亡情况。②动物神经功能缺损分级变化:动物神经功能缺损分级方案参照BdeerSn0[2]及爱丁堡与斯堪的那维亚研宄组方案。具体分级标准如下：0级：正常I级：一侧肢体轻度无力，略有跋行，可以直线进行或有偏行（半径超过lm）。II级：一侧肢体明显无力，头部轻度向另侧歪斜，破行，不能

7、向正前直行，偏行半径在0.5-.075m左右。III级：一侧偏瘫，站立比较困难不能行走，但可以正卧位，有显著的歪头、口角歪斜。IV级：一侧偏瘫，不能正卧，呈侧卧甚至仰卧，歪头及身体扭曲明显，或不能自主进食，神志迷蒙或抽搐频繁（10分钟内2次以上）。V级：昏迷或死亡。1.4脑水含量测定取栓塞段SSS旁脑组织约O.lg，吸除表面残水，置于称量杯中使用电子天平称取湿重。从开颅取脑到称重完毕控制在5min内。再将脑组织置电热恒温干燥箱内105°（?烘干24卜至恒重（两次恒重之差＜0.2mg）称取干重。根据Ell

8、iott公式采用干湿法计算脑组织含水量：脑含水量（％）=（湿重一干重）/湿重X100%。1.5HE染色取窦旁脑组织一块，立即置于4%多聚甲醛溶液中固定72h，常规石蜡切片HE染色后光镜观察。1.6统计学处理计量资料采用t检验。计数资料米用秩和检验。2结果2.1神经功能缺损分级①动物一般情况：实验过程中剔除1大鼠因麻醉意外死亡，3大鼠因颅内水肿明显合并颅内出血死亡，并且补充。大鼠于造模术后均有不同程度的精神萎靡，自洁能力下降，部分大鼠呈昏睡状