人细胞色素p4502a13基因在口腔癌中表达的研究

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1、11.7692andinnolymphnodemetastasiswas15.2308（P=0.1321），⑦TNMstages（Ⅰ+Ⅱ）was17.375andTNMstages（Ⅲ＋Ⅳ）was11.7778（P=0.0452）.ConclusionDown-regulatedexpressionofCYP2A13maybeinvolvedinthedevelopmentandprogressionoforalcancerduetotheincreasedactivityofcertaincarcinogensandtheexactmechanismneedfurtherstudy.K

2、EYWORDSCytochromeP4502A13;oralcancer;Real-timePCR;Western-blottingIV符号说明英文缩写英文名称中文名称CYP2A13cytochromeP4502A13细胞色素P4502A13AFB1AflatoxinB1黄曲霉素B1NNK4-(methylnitrosamino)-1-4-甲基亚硝胺-1-3-吡啶(3-pyridyl)-1-butanone基-1-丁酮β-actinβ-actinβ肌动蛋白DEPCdiethypyrocarbonate二乙基焦碳酸酯μlmicrolitre微升mlmillimeter毫升rpmrevolu

3、tionsperminite每分钟转数V前言肿瘤发生是环境因素和遗传因素相互作用的结果，不同个体对环境中各种前致癌物的代谢活化能力差异决定了个体间对肿瘤的易感性大小。环境中的前致癌物进入人体后，在І相代谢酶的作用下转化为毒性和致癌作用更强的终致癌物，促进肿瘤的发生。细胞色素P450是体内重要的І相代谢酶，参与代谢活化多种外源性前致癌物。人类CYP450基因表达水平及表型的差异性已被确认为是改变机体对环境致癌易感性大小的一个重要决定因素。细胞色素P4502A13(cytochromeP4502A13,CYP2A13)是2000年发现的具有酶活性的细胞色素P450酶[1]。该酶主要在呼吸系统

4、中表达，可代谢活化多种前致癌物，且是目前为止发现的代谢活化烟草中重要前致癌物4-甲基亚硝胺-1-3-吡啶基-1-丁酮（4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone，NNK）能力最强的CYP450酶。此外，有研究表明CYP2A13还对黄曲霉素B1（AflatoxinB1，AFB1）具有高效代谢活化作用。而最近有研究表明，NNK与AFB1与呼吸系统肿瘤的发生有关。因此，CYP2A13在体内的表达量的多少和酶活性的高低可能与机体罹患呼吸系统肿瘤的易感性大小密切相关。本研究通过比较CYP2A13在口腔癌组织及其对应癌旁组织中的表达情况，分析探讨CY

5、P2A13与口腔癌的相关性，为深入研究口腔癌的发生机制提供实验依据。1人细胞色素P4502A13基因在口腔癌中表达的意义材料与方法11.7692材料1.1标本来源收集2008年1月—2009年4月中山大学附属医院口腔癌手术标本26对。手术标本切除后立即取材，避开肿瘤坏死与出血部位无菌条件下取肿瘤组织一块及癌旁组织（距瘤块组织3cm以上）一块，手术切除组织均分为两部分，一部分大小约1cm3，切除后立刻置于液氮中储存，然后置于-80℃冰箱冻存，用于RNA和蛋白提取。另一部分用10%福尔马林固定，石蜡包埋，行H-E染色明确病理特征。1.2临床及病理资料26例口腔癌标本中：男性13例，女性13例

6、；年龄28-88岁，中位年龄58岁；年龄≤55岁13例，年龄＞55岁13例；高分化口腔癌21对，中分化口腔癌2对，低分化口腔癌3对；有淋巴结转移13例，无淋巴结转移13例；Ⅱ期7例，Ⅲ期5例，Ⅳ期14例；肿瘤直径＜3cm的8例，肿瘤直径≥3cm的18例；所有病例术前均未行放、化疗。1.3主要仪器设备和试剂1.3.1主要仪器设备轮转切片机（Rm2235）LEICA公司显微镜Olympus公司烤箱上海跃进医疗器械厂不锈钢高压锅福州迈新生物技术开发有限公司微量移液器Eppendorf公司2ABI9700荧光PCR定量扩增仪美国ABI公司CEQ8000测序仪美国BIO-RAD公司稳压稳流电泳仪美

7、国BIO-RAD公司紫外凝胶成像分析系统美国BIO-RAD公司高速离心机德国Heraeus公司CS-15R低温离心机美国Beckman公司JA1003N电子天平上海SHANGPING公司LibraS32PC紫外分光光度计英国BIOChrom公司恒温水浴箱德国Menmert公司多用脱色摇床(TY-B型)上海市新波无线电厂11.7692主要试剂鼠抗人多克隆抗体AvivaSystemsBiology公司羊抗鼠-IgGAvivaSystem