遗传育种技术

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1、实验三花粉的贮藏和生活力测定目的和要求在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力，就是花粉的生活力。花粉生活力测定在杂交工作中很重要，尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时，花粉要经过一段较长时间的贮藏运输过程，因此在杂交前应检验花粉的生活力，以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败。从生产上来看，在选择相互授粉的品种时，也应考虑到品种的花粉发芽能力，凡是花粉发育不全的品种，其花粉的发芽率都很低。因此不适宜做授粉品种。本实验的主要目的是掌握花粉贮藏和花粉生活力测定的方法。材料及用具材料：桃或苹果树的花粉。用具：显微镜、天平、盖玻片、凹式

2、载玻片、培养皿、干燥器、试管、滴瓶、蒸馏水、凡士林、蔗糖、氯化钙、琼脂、联苯胺、α-奈酚、碳酸钠、过氧化氢等。实验内容及方法花粉贮藏：花粉生活力试验：花粉贮藏：管口塞以棉花或橡皮塞，贴上写有品种名称的标签。花粉瓶放于干燥器内，使花粉在空气相对湿度较低的条件下（一般0～40%）保存为了减少呼吸作用，可以放在低温（0～4℃）黑暗的地方贮藏。采摘刚开的花朵取花药置培养皿干燥室内花药开裂花粉倒入指形管花粉生活力试验：花粉发芽法和染色法花粉发芽法培养基的制作与接种5～20%蔗糖（葡萄糖）、1～2%琼脂、蒸馏水。加热煮沸约40℃温度不凝固，用玻璃棒

3、点一点培养基敷在载玻片的凹坑内接种针（解剖针）沾少量花粉。轻轻振动，使花粉均匀地撒在培养基上，载玻片放在垫有湿润棉花培养皿内或倒扣在培养皿上，贴上标签写明处理、种类、播种日期培养皿放于20℃的恒温箱中培养。制作培养基培养基置载玻片花粉撒在培养基写明标签恒温培养花粉生活力试验：花粉发芽法和染色法花粉发芽法观察记数在显微镜下隔一定时间检查一次（花粉发芽快的经过几个小时即可观察到已经发芽，慢的需24小时以上）若发现花粉已发芽时，便按一定方向，就同一视野中用记数器记录花粉粒总数和发芽数，观察记录3～5个显微镜视野的数字，求其平均数，即得出花粉发

4、芽百分率。花粉发芽的标准，以花粉管伸长超出花粉直径为准。花粉生活力试验：花粉发芽法和染色法染色法过氧化物酶测定法原理：具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶。此酶能利用过氧化物使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色，依据颜色可知花粉有无活力。联苯胺a-萘酚对二萘氧基联苯胺（紫红色）花粉生活力试验：花粉发芽法和染色法染色法碘-碘化钾染色法原理：正常的花粉积累淀粉较多，而不正常的花粉则少。据此，可用化学物质染色，根据呈色反应来间接测定花粉的正常与否和花粉生活力的差别。通常正常花粉用I-KI染色后呈蓝色，而发育不良畸形花粉则不积累淀粉，当I-K

5、I染色时呈黄褐色。花粉生活力试验：花粉发芽法和染色法染色法氯化三苯基四氮唑（TTC）法原理：凡具有生活力的花粉，在其呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的花粉则无此反应，因此当TTC渗入有生活力的花粉时，花粉中的脱氢酶在催化去氢过程中与TTC结合，使无色的TTC变成三苯基甲（TTF）而呈红色。实验四果树有性杂交技术目的和要求果树有性杂交是创造果树新类型的主要方法之一，本实验是通过品种间杂交的实际操作，掌握果树的有性杂交技术。材料及用具材料：桃。用具：镊子、小剪刀、纸牌、透明纸袋、授粉器或毛笔、细棉纱线或回形针、干燥器、指形管、棉花

6、、酒精（70%）、红漆。有性杂交技术——桃树的杂交桃的花器结构及开花习性通常花萼5枚，花瓣5枚，雌蕊1枚，雄蕊多数成三轮着生，花梗很短，花托成杯状，花萼、花瓣及雄蕊着生于花托上，雌蕊与雄蕊的长短依品种而不同，桃花芽为纯花芽，着生在一年生新梢上。一般3月下旬至4月上开花，在一株树上开花初期到盛花期大致经过5～7天，这是授粉的最适时期。桃的绝大多数品种是自花能实，因此，在杂交前必须去雄。杂交技术亲本植株和授粉花枝的选择和处理树龄最好10～15年生，发育良好，在生长期内新梢长度能达50～60厘米，叶片健康无病虫害最好选用长果枝上的花，其次是中

7、果枝，多复芽而充实的枝条座果好，着生在树冠中部和上部的花比在树冠内部和下部的花可靠而又座果好，一般以在长果枝上杂交4～5朵花能结2～3个果为原则，中果枝上杂交3～4朵花杂交用花最好在枝条上有一定间隔，同一枝上不作杂交的花应该除去。杂交技术去雄与套袋去雄通常在开花前1～2天，即花苞达最大而花瓣尚未裂开时进行。如花蕾内有虫或个别花药已裂，则应去除不用。为避免去雄后的花朵天然杂交，在去雄后应立即套袋隔离，袋内要留有适当空隙，使花朵生长良好，袋自上而下套入，袋口用曲别针或细麻线缝在结果枝上，并挂上纸牌。套袋最好采用“袖筒式”套在整个果枝的中央，

8、袖筒大小为27.5厘米×9.0厘米，1张报纸做8个袋，也有单个花朵用一个纸袋的。27.5cm9cm杂交技术花粉的采集和保存采集父本花粉的花朵应在花蕾期，花将开放而花粉尚未从花药撒出时摘去花朵，带入室内在光滑