生化综述,心肌肌钙蛋白ctni检测方法及其影响因素和临床应用进展

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1、综述题目：cTnI检测方法及其影响因素和临床应用进展姓名：学号：系别：年级：专业：二○一二年三月心肌肌钙蛋白I检测方法及其影响因素和临床应用进展摘要心肌肌钙蛋白I(cTnI)是心肌损伤最特异、最敏感的血清标志物之一，目前已被广泛地应用于临床诊断。但cTnI检测方法尚未标准化，血液循环中cTnI浓度的检测也受血浆肝素浓度、类风湿因子水平、溶血、慢性肾脏衰竭、年龄等多种因素干扰。cTnI广泛在诊断急性心肌梗塞(AMI)，监测心脏手术，诊断不稳定型心绞痛，骨骼损伤或慢性肾衰伴有心肌损伤的鉴别方面有广泛应用。前言传统的心肌酶谱包括天门冬氨酸转氨酶（AST），乳酸脱氢酶（LDH）及其同工酶和肌酸激酶（

2、CK及其同工酶。传统的心肌酶谱由于特异性较差，敏感性和精确性不高和不能及时反映疾病等弊端，现在在心脏疾病的标志物中已少用。心肌损伤标志物是近十年来临床生物化学钟发展最快的部分，出现了一批项目及许多研究应用报告。心肌肌钙蛋白由于其敏感性和特异性都高的特点，为心肌损伤的诊断带来了新气象，提高了对微小损伤的诊断成功率，为临床广泛应用，诊断指标从酶类为主转向了以蛋白类为主。肌钙蛋白（Tn)是组成横纹肌细丝的结构蛋白，其亚单位I、T、C组成复合物，在肌肉收缩和舒张过程中起重要作用。其中，心肌肌钙蛋白I(CTnI)经大量的研究，已被证实为心肌损伤最特异性、最敏感的血清标志物之一，正逐渐取代肌酸激酶MB同

3、工酶(CK—MB)成为判断心肌损伤，特别是急性心肌梗塞(AMI)的“金标准”。本文介绍CTnI检测方法及影响因素和临床应用进展。关键词心肌肌钙蛋白I检测方法影响因素临床应用1.结构性质肌钙蛋白(troponin，Tn)是组成横纹肌细丝的结构蛋白，可调节钙介导的肌动蛋白和肌球蛋白之间的相互反应，本身为多肽。其亚单位I、T和C组成复合物。其中Tnl是肌原纤维ATP酶的抑制单位，可抑制肌球蛋白与肌动蛋白结合，阻止肌肉收缩。人℃TnI氨基末端有32个氨基酸残基为sTnI所不具有，因此抗原性有较大差异，有利于获得特异性cTnI抗体【1】。Katrukha【2】等口一研究认为：心肌损伤后循环中cTnI主

4、要以cTnI-TnC二元复合物存在，少量以游离cTnI存在。心肌细胞损伤早期，胞浆内游离cTnI首先释出，循环中cTnI于4～6h升高，随后肌原纤维不断崩解破坏，cTnI—TnC复合物不断释出，循环中cTnI于18～24h达高峰，一周后才降至正常。2.实验室检测方法进展cTnI的检测方法有放射免疫法(采用多克隆抗体)、ELISA(酶联免疫分析)法，但均由于测定耗时过长、敏感度偏低、CV值偏大等原因已被淘汰。心肌损伤标志物的检测周转时间(TAT)对于心肌损伤患者的及时诊断和治疗非常重要。1999年以来的重要文件大都要求检测心肌损伤标志物时从标本采集到医生得到检测报告的TAT≤1h。2002年的

5、ACC／AHA文件更进一步要求心肌损伤标志物TAT最好能≤0．5h【3】。金标免疫法标本用量少，简便快速，适合于AMI的床旁检测，不受时间、地点限制，24h4全方位为患者服务，但结果只能定性，并受主观因素影响。目前应用较多的是电化学发光免疫检测法(ECLIA)和酶联荧光分析法(ELFA)。在美国，第一个被FDA认证用于检测cTnI的是DadeStratuslI检测法(采用两种cTnIMAb，自动化双位点荧光酶免疫定量检测，参考值≤0.35btg／L，鉴别值>1.5ug／L【4】。美国临床化学学会(AACC)目前正在完善cTnI检测的标准。2.1电化学发光免疫检测法(ECLIA)该法应用双抗体

6、一步法夹心酶免疫分析法，以化学发光剂为底物，用单克隆抗cTnIIgG抗体包被的磁性微粒作为固相载体(例如，用树脂、磁性微粒、聚苯乙烯珠等作为载体)把抗体与小分子颗粒结合，提高抗体的捕捉能力，增加了吸咐表面积，可在磁场中与液体分离，简化了操作步骤。提高了灵敏度，节省了出报告的时间。2.2酶联荧光分析法(ELFA)【5】此法系法国生物梅里埃公司近来开发的一种新技术(VIDAScTnI)，在eTnI检测中具有操作简便、自动化程度高、测定快速、结果准确可靠等特点。VIDAScTnI检测试剂盒采用一步免痰荧光法，以连接ALP的抗eTnI单克隆抗体包被固相载体(SPR)，在血清样品被吸人SPR管内与包被

7、的cTnI通过洗涤被除去。底物4一甲基伞形酮磷酸盐在ALP催化下生成荧光产物4一甲基伞形酮，在450ilm检测荧光强度，与标准曲线比较自动计算血清eTnI浓度。3.影响因素3.1肝素对于自动化免疫分析仪，推荐应用肝素化血浆而不是血清，可省去凝血所需的时间。但Gerhardt等【6】．发现肝素影响cTnI检测。Katrukha等【7】认为肝素可通过改变cTn分子结构或直接覆盖cTn的抗原决定簇而降低其免疫反应性