链球菌属的微生物检验分析

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1、链球菌属的微生物检验分析王春玲张圣颖(黑龙江省哈尔滨市阿城区疾病预防控制中心黑龙江哈尔滨150000)【摘要】链球菌是临床常见的致病菌，对链球菌属的检查方法试验方法进行分析。采用标木的直接涂片和分离培养方法进行检查。掌握正确的检验方法,科学地分离鉴定，为临床出作合理的诊断。【关键词】链球菌属；微生物检验；试验方法【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2016)16-0391-02链球菌属，亦属化脓性球菌中的一大类常见菌。为链状、单个或成双排列的革兰阳性球菌。分布广泛，存在于人及动物肠道和健康人鼻咽部，大多不致病。少数可引起人类的化

2、脓性炎症、猩红热、新生儿败血症、细菌性心内膜炎以及风湿热、肾小球肾炎等超敏性疾病。1.一般资料对微牛.物实验室接收实验样木70例，其中咽拭子样木6例，痰液样木24例，分泌物16例，穿刺液4例，尿液14例、脑脊液1例，血液培养15例。其中门诊患者样木4例，住院患者样木64例。细菌培养结果：阳性24例，阳性率34.2%,其中链球菌属阳性为2例。2.检查方法标木的直接涂片，革兰染色后镜检，如符合链球菌形态且无正常菌群污染的标木可初报。分离培养，血液标木须先增菌培养；其他标木多采用羊血平板，有利于识别溶血性。初代分离需用5%的CO2、35〜37°C环境中孵育24h观察菌

3、落性状［1］。3.试验方法3.1溶血性检查溶血性是鉴定球菌最常用的项0，也是鉴定过程中重要的一步。1919年Brown对溶血性进行了描述。3.1.1菌种α溶血或称甲型溶血，在血平板上，菌落周围部分红细胞被破坏，呈现一个草绿色环。β溶血或称乙型溶血，在血平板上，菌落周围红细胞完全溶解，呈现一个清楚透明溶血环。γ溶血或称丙型溶血，血平板上，菌落周围无红细胞溶解，因而无溶血环。溶血性的识别可在血平板表面菌落周围和穿刺处通过肉眼观察，也可用显微镜观察。除在分离血平板上观察菌落周围的溶血性外，还可用以下方法确认。3.1.2材料羊血平板。3

4、.1.3方法将标本接种于羊血平板上，用接种针在已接种过的血平板上扎2〜3处，使细菌被接种到琼脂层深处，35°C环境中孵育过夜。3.1.4观察结果在接种针穿刺过处，羊红细胞完全溶解，形成无色透明区，为β溶血。羊红细胞部分溶解呈草绿色的环，为α溶血。羊红细胞不溶解、无溶血环，为γ溶血。3.2Optochin敏感试验3.2.1材料Optochin(ethylhydrocupreineHCL)纸片(直径6mm),每片含5μg。血平板。3.2.2方法挑取被检菌落，涂在血平板上，贴Optochin纸片于接种处，35°C、5%〜10%的

5、C02环境中孵育18ho3.2.3观察结果抑菌环直径≥14mm为敏感，推断肺炎链球菌。抑菌环直径<14mm吋参照胆汁溶菌，或为其他草绿色链球菌。3.3杆菌肽敏感试验3.3.1材料含0.04U/片的杆菌肽纸片，血平板。3.3.2方法挑取被检菌落，密涂于血平板上，接种量应大，以免出假阳性。贴上杆菌肽纸片，35°C环境中过夜［2］。3.3.3观察结果形成抑菌环为敏感，则被检菌推断为A群链球菌。3.4CAMP试验3.4.1材料血平板，金黄色葡萄球菌ATCC25923。3.4.2方法在血平板上，用金黄色葡萄球菌划种一条直线，再将被检菌距金黄色葡萄球菌3mm处垂

6、直接种一短线。用同样方法接种阴性和阳性对照菌。35°C环境中孵育过夜。3.4.3观察结果在被检菌接种线与金葡菌接种线之间有一个矢形（半月形）加强溶血区，此即CAMP试验阳性。阴性无加强溶血区。3.5胆汁-七叶苷试验（平皿法或斜面法）3.5.1方法接种被检菌1〜3个菌落于胆汁-七叶苷试验平板或试管中，置35"C环境中,孵育24〜48h。3.5.2观察结果培养基变黑色或棕褐色为阳性，不变色为阴性［3】。3.5.3注意事项接种细菌量不能过大。本试验是测定细菌在胆盐中生长情况及冋吋分解七叶苻的能力，如接种菌量过大，细菌不需要生长而本身固奋的酶足以造成七叶苷分解，出现假阳

7、性结果。3.6七叶苷试验3.6.1方法同胆汁-七叶苷试验：接种被检菌于培养基中，35°C过夜。3.6.2观察结果培养基变黑为阳性，不变为阴性。3.76.5%NaCI生长试验本试验是测定细菌在高盐中的生长能力，葡萄糖作为是否生长的指示剂。3.7.1方法接种被检菌，35°C环境中孵育过夜。3.7.2观察结果培养基上生长出菌落并变黄色为阳性，不变色为阴性。3.7.3注意事项本试验细菌接种量不能过大；否则，细菌并不需要繁殖即可使葡萄糖产酸，培养基变色，导致假阳性结果。3.8色素试验色素试验在鉴定B群链球菌的几个方法中，特异性最好。这是Noble改良的Islam法。3.8

8、.1方法接种被检菌，35