mt-gag对汞引起红细胞溶血的抑制作用

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时间:2018-10-26

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1、MT-GAG对汞引起红细胞溶血的抑制作用1,内蒙古医科大学内蒙古呼和浩特010059;2,广东医学院生理教研室5240233,湛江市霞山骨伤科医院524030;4,湛江市索奇生物技术有限公司广东湛江524000摘要:目的:通过检测MT-GAG对HgCI2引起的红细胞溶血率减少的百分数,考察其稳定性和活性。方法:用新鲜兔全血制备红细胞悬液,在使红细胞全部溶血的Hg离子环境中加入不同受热时间的MT、MT-GAG溶液,测定417nm下的吸光值。结果:MT-GAG在105°C受热30分钟时溶血率减少的百分数HMT≥77%。结论:MT-GAG比MT

2、可耐受更长的受热时间,对HgCI2引起的红细胞溶血具有抑制作用。关键词.•MT;MT-GAG;红细胞溶血;抑制作用;汞金属硫蛋白(MT)是一种广存于生物体内宮含半胱氨酸的金属结合蛋白。自从Margoshes(1)首次从马肾中分离出金属硫蛋白后,对其在Cd、Hg、Pb等重金属解毒的重要性方面己有大量的研究报道(2-7)。在机体组织受到损伤、炎症、射线輻照和重金属含量增大时,体内的金属硫蛋白含量剧增,并参与机体应激时的细胞适应反应,是机体损伤的第一防御蛋白(8)。糖胺聚糖(GAG)是由含己糖醛酸和己糖胺成分的重复二糖单元连接成的直链杂多糖。专利产品

3、MT-GAG是糖胺聚糖与金属硫蛋白组成的糖蛋白,分子中的寡糖可通过改变蛋白质的疏水性、电荷、溶解度、粘度、质量和大小修饰蛋白质的理化性质,可起着稳定糖蛋白,使其能抵抗变性的作用。为验证MT-GAG的稳定性和活性,我们使用由广东湛江市索奇牛.物技术有限公司课题组提供的MT、GAG和MT-GAG进行实验,以观察105°C不同受热时间下三种物质对HgCI2引起的红细胞溶血的抑制作用。材料、方法与结果:1.材料:MT、GAG和MT-GAG(均由湛江市索奇生物技术有限公司课题组提供);氯化汞由贵州铜仁汞矿试剂厂生产;离心机(XY180-2T);分光光度计

4、(53WBUV/VIS);三公斤以上的家兔由广东医学院动物中心提供;2.方法与结果:2.1红细胞悬液的制备:取新鲜兔肝素抗凝血2ml,2500r/min离心5min,吸掉血浆与白细胞,红细胞用10倍PBS清洗后,2500r/min离心5min,弃掉上清液,重复清洗三次后,配成l×108红细胞/ml悬液,备用。2.2氯化汞浓度与溶血率的关系:测定Hg2+浓度0〜2×10-4mol/L对兔血红细胞溶血的影响。取以上配制的红细胞悬液,吸取0.1ml,分别加入7.90ml不同浓度的HgCI2溶液(Hg2+浓度0〜2×

5、10-4mol/L),轻描后于37°C温育30min,然后在3000r/min离心5min,取上清液测定417nm下的吸光值,计算溶血率Hp=(A-A0)/(A∝-AO),式中A0为不加HgCI2时上清液的吸光值,A为加入一定HgCI2后对应的上清液吸光值,A∝为HgCI2浓度人到红细胞完全溶血时对应的吸光值。从下表中可见随Hg2+浓度增加,Hp%增大,当Hg2+浓度〉37.5×10-6mol八时,Hp%有突跃,大于56.3×10-6mol/L吋,红细胞全部溶血,试验重复5次取平均值。见表1。2.3M

6、T对HgCI2引起的红细胞溶血的抑制作用:取用NaCI调等渗后的l×10-6mol/LMT—定量,加入到2×10-5mol/LHgCI21.0ml溶液中,使MT与HgCI2浓度比达到一定值,用PBS调体积到7.9ml,混合均匀后,放置5min再加0.1ml红细胞悬液,使总体积为8ml,轻摇后于37°C温育30min,然后在3000r/min离心5min,取上清液测定417nm下的吸光值,每个浓度比分别以相应CMT浓度中不加HgCI2为空白对照管,试验重复5次取平均值。A∝=0.620±0.015是

7、不加MT红细胞完全溶血吋吸光值,计算溶血率减少的百分数HMT=1—A/A∝,以下数据可以看出随体系中MT含量的增高,红细胞溶血率减少的百分数HMT就增大。见表2。2.4MT、GAG与MT-GAG在不同受热吋间对HgCI2引起的红细胞溶血的抑制作用:取2.25×10-4mol/LHgCI2溶液2ml,分别加入经105°C不同受热时间处理后l×10-6mol/L的MT、GAG、MT-GAG0.4ml,用NaCI调等渗,使MT、GAG、MT-GAG与HgCI2摩尔浓度比达到8.89×10-4,用PBS调体

8、积到7.9ml,混合均匀后,放置5min再加0.1ml红细胞悬液,使总体积为8ml,轻摇后于37°C温育30min,然后在3000r/min离心5mi

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