mt-gag对汞引起红细胞溶血的抑制作用

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1、MT-GAG对汞引起红细胞溶血的抑制作用1,内蒙古医科大学内蒙古呼和浩特010059;2，广东医学院生理教研室5240233,湛江市霞山骨伤科医院524030；4,湛江市索奇生物技术有限公司广东湛江524000摘要：目的：通过检测MT-GAG对HgCI2引起的红细胞溶血率减少的百分数，考察其稳定性和活性。方法：用新鲜兔全血制备红细胞悬液，在使红细胞全部溶血的Hg离子环境中加入不同受热时间的MT、MT-GAG溶液，测定417nm下的吸光值。结果：MT-GAG在105°C受热30分钟时溶血率减少的百分数HMT≥77%。结论：MT-GAG比MT

2、可耐受更长的受热时间，对HgCI2引起的红细胞溶血具有抑制作用。关键词.•MT;MT-GAG；红细胞溶血；抑制作用；汞金属硫蛋白（MT）是一种广存于生物体内宮含半胱氨酸的金属结合蛋白。自从Margoshes（1）首次从马肾中分离出金属硫蛋白后，对其在Cd、Hg、Pb等重金属解毒的重要性方面己有大量的研究报道（2-7）。在机体组织受到损伤、炎症、射线輻照和重金属含量增大时，体内的金属硫蛋白含量剧增，并参与机体应激时的细胞适应反应，是机体损伤的第一防御蛋白（8）。糖胺聚糖（GAG）是由含己糖醛酸和己糖胺成分的重复二糖单元连接成的直链杂多糖。专利产品

3、MT-GAG是糖胺聚糖与金属硫蛋白组成的糖蛋白，分子中的寡糖可通过改变蛋白质的疏水性、电荷、溶解度、粘度、质量和大小修饰蛋白质的理化性质，可起着稳定糖蛋白，使其能抵抗变性的作用。为验证MT-GAG的稳定性和活性，我们使用由广东湛江市索奇牛.物技术有限公司课题组提供的MT、GAG和MT-GAG进行实验，以观察105°C不同受热时间下三种物质对HgCI2引起的红细胞溶血的抑制作用。材料、方法与结果：1.材料：MT、GAG和MT-GAG(均由湛江市索奇生物技术有限公司课题组提供);氯化汞由贵州铜仁汞矿试剂厂生产；离心机(XY180-2T);分光光度计

4、(53WBUV/VIS)；三公斤以上的家兔由广东医学院动物中心提供；2.方法与结果：2.1红细胞悬液的制备：取新鲜兔肝素抗凝血2ml，2500r/min离心5min,吸掉血浆与白细胞，红细胞用10倍PBS清洗后，2500r/min离心5min，弃掉上清液,重复清洗三次后，配成l×108红细胞/ml悬液，备用。2.2氯化汞浓度与溶血率的关系：测定Hg2+浓度0〜2×10-4mol/L对兔血红细胞溶血的影响。取以上配制的红细胞悬液，吸取0.1ml,分别加入7.90ml不同浓度的HgCI2溶液(Hg2+浓度0〜2×

5、10-4mol/L)，轻描后于37°C温育30min,然后在3000r/min离心5min，取上清液测定417nm下的吸光值，计算溶血率Hp=(A-A0)/(A∝-AO),式中A0为不加HgCI2时上清液的吸光值，A为加入一定HgCI2后对应的上清液吸光值，A∝为HgCI2浓度人到红细胞完全溶血时对应的吸光值。从下表中可见随Hg2+浓度增加，Hp%增大，当Hg2+浓度〉37.5×10-6mol八时，Hp%有突跃，大于56.3×10-6mol/L吋，红细胞全部溶血，试验重复5次取平均值。见表1。2.3M

6、T对HgCI2引起的红细胞溶血的抑制作用：取用NaCI调等渗后的l×10-6mol/LMT—定量，加入到2×10-5mol/LHgCI21.0ml溶液中，使MT与HgCI2浓度比达到一定值，用PBS调体积到7.9ml，混合均匀后，放置5min再加0.1ml红细胞悬液，使总体积为8ml，轻摇后于37°C温育30min，然后在3000r/min离心5min，取上清液测定417nm下的吸光值，每个浓度比分别以相应CMT浓度中不加HgCI2为空白对照管，试验重复5次取平均值。A∝=0.620±0.015是

7、不加MT红细胞完全溶血吋吸光值，计算溶血率减少的百分数HMT=1—A/A∝，以下数据可以看出随体系中MT含量的增高，红细胞溶血率减少的百分数HMT就增大。见表2。2.4MT、GAG与MT-GAG在不同受热吋间对HgCI2引起的红细胞溶血的抑制作用：取2.25×10-4mol/LHgCI2溶液2ml,分别加入经105°C不同受热时间处理后l×10-6mol/L的MT、GAG、MT-GAG0.4ml,用NaCI调等渗，使MT、GAG、MT-GAG与HgCI2摩尔浓度比达到8.89×10-4，用PBS调体

8、积到7.9ml,混合均匀后，放置5min再加0.1ml红细胞悬液，使总体积为8ml,轻摇后于37°C温育30min,然后在3000r/min离心5mi