酒精性肝病与肝细胞凋亡关系的研究

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1、酒精性肝病与肝细胞凋亡关系的研宄【关键词】酒精性肝病1乙醇体外诱导肝细胞凋亡与TGF0和抗Fas单克隆抗体对肝细胞的凋亡诱导作用相似［1］，低浓度的乙醇能够在体外诱导培养的大鼠肝细胞发生凋亡［2］。由于肿瘤细胞的易培养性，往往以肝癌细胞代替肝细胞建立乙醇诱导肝细胞凋亡的实验模型。乙醇能够诱导肝癌细胞系HepG2细胞凋亡，并且其诱导凋亡的效果强于丝裂霉素C［3］。用不同浓度的乙醇作用于HepG2细胞和人正常肝细胞系HPH细胞不同时间之后，每例取6X103个细胞进行透射电镜分析。发现乙醇对肝细胞的凋亡诱导作用强于对肝癌细胞的作用，而且肝细胞和肝癌细胞凋亡的发生程度与乙醇的浓度和作

2、用时间显著正相关［4］。2酒精性肝病中的肝细胞凋亡Kawahara等［5］用免疫组化法检测了凋亡相关抗原Lewis在20例ALD患者的肝活检组织的表迗情况，发现含Mallory小体的肝细胞呈Lewis抗原阳性表达，提示至少部分含Mallory小体的肝细胞以凋亡的方式被清除。TUNEL法检测结果表明，ALD组织的凋亡发生率明显高于正常肝组织，并且在气球样变性、胆汁淤积、炎症区和结节性肝硬化部位更为明显［6］。Goldin等［7］用连续23天乙醇蒸汽吸入法建立了小鼠ALD模型。在21只正常对照小鼠中，只有36%的肝末端小静脉可见凋亡小体，并且这些凋亡小体中的88%位于中央静脉周围

3、两排的肝细胞。实验组41只小鼠中，72%的肝末端小静脉可见凋亡小体，并且这些凋亡小体大多数不只是位于中央静脉周围两排的肝细胞，肝细胞凋亡程度与肝细胞损伤程度密切相关。在停止吸入酒精蒸气后，肝细胞凋亡现象逐渐减轻，并且经过一段时间之后肝组织结构可完全恢复正常。说明ALD中凋亡小体产生的数量和位置具有时间依赖性，肝组织损伤具有可复性。Baioni等［8］在用定量分析法证实了大鼠慢性酒精中毒肝细胞凋亡率上升的趋势之后，用以BrdU检测分裂期细胞的方法表明，其肝细胞增殖率也明显上升。在大鼠ALD的逐步发展过程中，不仅凋亡的肝细胞不断增多，而且肝细胞的增殖细胞核抗原阳性率也不断增高［9

4、］。在小型猪ALD模型中也可见到不仅肝细胞凋亡小体随着ALD的发展而明显增多，肝细胞的PCNA阳性表迗率也逐渐增高［10］。提示在ALD中肝细胞凋亡现象及其再生修复同时存在。3酒精性肝病中肝细胞凋亡的发生机制关于ALD中肝细胞凋亡的发生机制尚未完全阐明，目前认为其主要与以下几种因素有关：肝细胞色素P4502E1的活化。在正常肝脏中，CYP2E1主要分布在中央静脉周围的肝细胞，此处正是ALD病理损伤的好发部位。在ALD组织中，CYP2E1活性普遍较高。CYP2E1具有很强的MADPH氧化酶活性，可使乙醇氧化生成羟乙基根，使肝细胞反应性氧中间产物和脂质过氧化终产物增多，产生对肝细

5、胞的毒性作用，引起肝细胞凋亡。经逆转录病毒载体介导把CYP2E1基因转染到HepG2细胞中，并使其稳定表达。在乙醇诱导下转染CYP2E1基因的细胞较未转染的细胞更容易发生凋亡CYP2E1拮抗剂，抗氧化剂都能够对抗乙醇对肝细胞的凋亡诱导作用［11］。从大豆中提取的一种多聚不饱和卵磷脂能够降低乙醇特异性CYP2E1的产生和对抗氧化，从而减轻乙醇引起的肝细胞凋亡，说明CYP2E1确实在乙醇诱导肝细胞凋亡中具有重要的作用［12］。肝脏铁负荷增加。铁可催化自由基的生成，并增强肝细胞的氧化应激反应。在大鼠饮食中加入碳酸铁，可加重其ALD所致的肝损伤，使肝细胞凋亡程度增加［13］。肿瘤坏死

6、因子和TNF受体的活性增高。用乙醇诱导凋亡的HepG2细胞与凋亡前相比，TNF-a表迗水平增高了35倍，IL-la和IL-6的水平也分别有所增高［14］。乙醇能够阻止TNF-a激活肝细胞内对氧化还原作用敏感的转录因子NFkB，使肝细胞增殖活性下降，肝细胞对BclxL等生存基因的表迗减弱，破坏TNF-ct和其他与肝细胞生长调节有关的细胞因子对肝脏的营养和保护作用［15］。促氧化物增多和抗氧化物减少造成的氧应激反应。乙醇代谢过程中产生的氧化剂能够诱导肝细胞发生凋亡，并使DNA产生片段化。谷胱甘肽等细胞内的抗氧化剂能够对抗乙醇引起的肝细胞凋亡［16］。用共聚焦显微镜研究的结果显示，

7、能够对抗乙醇引起的氧化压力的试剂可有效地减轻乙醇引起的肝细胞凋亡或坏死。并且，细胞内抗氧化剂的抑制剂能够加重乙醇诱导的肝细胞凋亡［17］。肌纤维母细胞和TGF-3的诱导凋亡作用在ALD中，来自肝星状细胞的肌纤维母细胞不仅能够合成和分泌一些胶原和非胶原基质蛋白，而且可使成纤维生长因子TGF-P的分泌增加。TGF-P是一种公认的肝细胞凋亡诱导剂。Gressner等［18］分离了大鼠的肌纤维母细胞，并在体外观察此肌纤维母细胞对肝细胞的凋亡诱导作用。发现当肌纤维母细胞分泌TGF-3时，用DNA荧光染料Hoech