lnt对视神经损伤后rgc保护作用的实验研究

《lnt对视神经损伤后rgc保护作用的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、LNT对视神经损伤后RGC保护作用的实验研究论文导读：随机分成5组，一组（6只12眼）为正常对照组，另4组（各12只12眼）为实验损伤组，其中左眼为损伤对照组（即视神经钳夹＋玻璃体腔内注射0.1ml生理盐水组），右眼为损伤治疗组（即视神经钳夹＋玻璃体腔内注射100ug/0.1ml香菇多糖组）。TUNEL检测试剂盒、超氧化物歧化酶（SOD）测试盒，均购自南京建成生物研究所。关键词：视神经损伤，香菇多糖，视X膜神经节细胞，超氧化物歧化酶视神经由视X膜神经节细胞（RGC）的轴突组成，为中枢神经系统的一部分，损伤后由于缺乏神经修复和再生所需的微环境和物质，因此视神经损伤后的治疗和功能

2、恢复是临床上的一个难题[1]。几十年来，视神经损伤的治疗多采用药物治疗和手术治疗两种方法。药物疗法多是采用神经营养因子、兴奋性氨基酸拮抗剂、神经节苷脂、钙通道阻滞剂、氧自由基清除剂、糖皮质类固醇等，对改善血管源性组织水肿，抑制过氧化脂质的形成，提高视神经损伤的组织修复能力，对恢复视神经功能起到一定的作用，但效果仍不理想，且多处于动物实验阶段。因此，寻找一种具有综合疗效且毒副作用小的神经保护剂是近两年众多学者研究的方向。许多人把目标转向了神经免疫疗法，并不断将免疫增强剂投入实验研究，已取得了一定成果。早在1998年我国就有将生物多糖注射入大鼠玻璃体内治疗视神经损伤的实验记载[2

3、]。香菇多糖（LNT）是1969年被首次发现。LNT进入机体后能快速通过血脑屏障及血眼屏障发挥作用，是目前国内外都广泛应用的抗肿瘤药物。实验证实香菇多糖有清除氧自由基、调节一氧化氮(NO)及抗脂质过氧化、提高SOD活性的作用[3,4]。本研究旨在通过Tunel及生化法检测RGC的凋亡及SOD活性变化情况，探讨LNT影响RGC的的影响进行了初步研究。1.1实验动物及分组纯种大耳白兔54只，体重3.00.2kg，雄性，外眼及眼底检查均正常。随机分成5组，一组（6只12眼）为正常对照组，另4组（各12只12眼）为实验损伤组，其中左眼为损伤对照组（即视神经钳夹＋玻璃体腔内注射0.1m

4、l生理盐水组），右眼为损伤治疗组（即视神经钳夹＋玻璃体腔内注射100ug/0.1ml香菇多糖组）。各组分别于伤后1d、3d、7d和14d取材。1.2主要试剂及材料香菇多糖，购自南京康海药业股份公司。论文参考X。TUNEL检测试剂盒、超氧化物歧化酶（SOD）测试盒，均购自南京建成生物研究所。论文参考X。1.3模型制备正常对照组不做任何处理。实验组均用10%的水合氯醛（3mg/kg）耳缘静脉注射麻醉，于兔眼眶上皮肤切口逐层分离暴露视神经。游离视神经约3mm，离后极部约3mm处用同一大号无创血管钳于同一部位钳夹视神经15s。术后兔眼对光反射迟钝，眼球无明显突出，眼压正常，眼睑闭合完

5、全者为成功模型。伤后充分散瞳，用无菌结核菌素皮试注射器抽取1mg／1ml的香菇多糖0.1ml（100ug）给实验损伤组兔右眼做玻璃体内注射，实验损伤组兔左眼同样方法注入0.1ml生理盐水，术后处理同右眼。1.4取材及固定实验损伤组的兔各组随机抽取四只分别于致伤后1d，3d，7d和14d用以下方法取材固定：10%的水和氯醛耳缘静脉注射麻醉。切开胸腔暴露心脏，将生理盐水冲洗液用输液器针头穿刺入左心室至升主动脉，剪开右心耳放血，至右心耳流出清亮液体为止，换成PH值为7.2的4%多聚甲醛固定液，再灌注固定15－20分钟。摘除眼球并保留视神经长约5mm，做角膜穿通口,置于上述固定液中固

6、定，常规脱水、透明、石蜡包埋、切片厚约2.5m，备用。其它动物采取空气栓塞法处死后，取出眼球，至于冰生理盐水中，剪开角巩膜缘，弃去眼前节及玻璃体，外翻眼球壁，在显微镜下剥离视X膜，分析天平称重，用生理盐水稀释，匀浆，低温离心机3000r/min离心10分钟，取上清液，黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性。1.5检测指标光镜下观察视X膜形态及视X膜节细胞数量的变化；行Tunel染色观察凋亡细胞的定位并计数；行黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性。1.6统计方法数据用SPSS13.0软件包,取为P=0.05检测标准采用单因素方差分析法进行统计分析。2结果2.1RGC形态及数量改变视X膜切片中显示

7、凋亡细胞不仅见于视X膜神经节细胞层，还见于内外核层。凋亡细胞胞核染色呈棕黄色，部分可由于核固缩扭曲破裂而失去正常形态，并可见凋亡小体。正常对照组视X膜切片偶见极少量的凋亡细胞0.31／mm2。本实验仅计数节细胞层的凋亡情况进行比较研究。损伤对照组：于伤后1d、3d、7d和14d的凋亡细胞数分别为1.58／mm2、14.21／mm2、25.61／mm2、12.09／mm2。损伤治疗组：于伤后各时间点的凋亡细胞数分别为1.10／mm2、9.95／mm2、18.33／mm2、10.20／mm2。除1d组外，同