不同浓度川芎嗪对人翼状胬肉成纤维细胞的作用

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1、不同浓度川芎嗪对人翼状胬肉成纤维细胞的作用【】目的观察川芎嗪对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞的抑制作用。方法收集眼科临床手术切除的人翼状胬肉标本，消化分离成纤维细胞，进行体外细胞培养。分别在pH为7.40和pH为6.00的条件进行，以无血清RPMI1640培养液配制终浓度为4.0mg/ml、2.0mg/ml、1.0mg/ml、0.5mg/ml和0.25mg/ml的川芎嗪药液，0.02%的丝裂霉素C（MMC）作为阳性对照组，pH为7.40和/或pH为6.00的RPMI1640培养液作正常对照组，对体外培养的胬肉成纤维细胞进行作用。通过光镜观察对细胞进行计数；四甲基偶氮唑盐（MTT

2、）技术检测显示细胞存活率，间接免疫荧光技术检测细胞波形蛋白（Vimentin）的表达。结果细胞计数和MTT法检测结果显示，在pH为7.40的条件下，与正常1640培养液组比较，4.0mg/ml的川芎嗪对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞均有明显的抑制作用（P＜0.001）。在pH为6.00的条件下，与正常1640培养液组比较，不同浓度的川芎嗪和pH为6.00的1640培养液对人翼状胬肉成纤维细胞均有明显的抑制作用，与pH为6.00的1640培养液组比较，4.0mg/ml的川芎嗪对人翼状胬肉成纤维细胞的抑制作用明显强于其他浓度的川芎嗪，0.5mg/ml和0.25mg/ml的川芎嗪可明

3、显促进人翼状胬肉成纤维细胞的生长（P＜0.001）。结论川芎嗪对人翼状胬肉成纤维细胞的生长具有双重作用，较高浓度的川芎嗪（4.0mg/ml）对人翼状胬肉成纤维细胞的生长有抑制作用。较低浓度的川芎嗪（0.5mg/ml、0.25mg/ml）在pH为6.00的条件下对人翼状胬肉成纤维细胞的生长有保护作用。　　【关键词】川芎嗪翼状胬肉成纤维细胞作用　　　　【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectoftetramethylpyrazineindifferentconcentrationonpterygiumfibroblastsinvitro.M

4、ethodsHumanpterygiumsamplesanpterygiumfibroblastsofthe3rdpassageethylpyrazineundertheconditionofpH7.40andpH6.00,0.02%mitomycin(MMC)andnormal1640culturedsolution.Thetetramethylpyrazineg/ml,2.0mg/ml,1.0mg/ml,0.5mg/mland0.25mg/mlusingRPMI1640culturesolutionundertheconditionofpH7.40or6.00,respec

5、tively.Thecellsicroscope.Thebiologicalactivitiesofhumanpterygiumfibroblastsethylthiazolytetrazolium(MTT)assay.Theidentificationofhumanpterygiumfibroblastsmunofluorescencemethod.ResultsBycellcountingandMTTassay,paredalcontrolgroupundertheconditionofpH7.40,thegrofibroblastsg/mltetramethylpyraz

6、ine(P＜0.001).UndertheconditionofpH6.00,paredalcontrolgroup,thegrofibroblastsethylpyrazineand1640culturesolutionethylpyrazineg/mlonpterygiumfibroblastsethylpyrazineethylpyrazine.I1640培养基（Gibco公司）、胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）、胰蛋白酶（AMRESCO，生工生物工程有限公司）、Ⅱ型胶原酶（Sigma公司）、乙二胺四乙酸二钠（EDTA）（华美生物有限公司）、盐酸川芎嗪（西安力邦

7、制药有限公司,061001B）、注射用丝裂霉素（Kyoentin小鼠单抗（SantaCruz公司）、Cy3标记二抗（Jackson公司）、CO2培养箱（德国宾德公司）、超净工作台（苏净集团安泰公司制造）、倒置显微镜（CarlZEISS公司，Axinvert200）、酶联免疫检测仪（BioTeKELX-800）、紫外线分光光度计（日本SHIMADZUUVmini1240）、pH计（SartoriusPB-10）、荧光显微镜（CarlZEISS公司，Axioplan2imaging）。　　1.2