白虎加桂枝汤对热痹模型大鼠特征性甲基化基因表达的影响

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1、白虎加桂枝汤对热痹模型大鼠特征性甲基化基因表达的影响  [摘要]考察?袢然肪诚氯缺阅P痛笫筇卣餍约谆?化基因及白虎加桂枝汤对热痹特征性甲基化基因的调控作用。采用大鼠足底注射CFA并复合湿热环境制备热痹大鼠模型。造模后第15天给予白虎加桂枝汤干预治疗30d。造模后每隔4d检测足容积,第45天采用HE染色法检测大鼠踝关节组织病理学,MeDIPSeq测序法检测大鼠膝关节滑膜甲基化水平并以取差集的方法筛选热痹模型特征性甲基化基因,悬浮芯片检测血清中IL1β,IL17,TNFα,EGF,IL12p70,IL4,IL6及IFNγ含量水平,qRTPCR检测大鼠滑

2、膜特征性甲基化基因mRNA相对表达水平。实验发现,与完全弗氏佐剂性关节炎(AA)模型组比较,热痹模型组足肿胀度和病理严重程度仅轻微增加;与空白组比较,2个模型组全基因CpG岛均呈低甲基化状态,热痹模型组甲基化水平最低,且AA模型组共705个差异性甲基化基因,热痹模型组共2418个差异性甲基化基因;与AA模型组比较,热痹模型组存在1287个差异性甲基化基因,其中共974个差异性基因甲基化下调,这些差异性基因显著分布于32个KEGGPathway中(P<005),此外启动子区上热痹特征性甲基化基因共52个,其中36个甲基化下调基因,16个甲基化上调基因

3、;药物干预后,白虎加桂枝汤显著改善热痹模型组足肿胀度和病理损伤,且明显降低IL1β,TNFα,EGF,VEGF,IL17,IL12p70的含量水平(P<005),还能抑制热痹特征性甲基化下调基因Ahcy及Rpl3mRNA的表达,促进热痹特征性甲基化上调基因AgxtmRNA的表达水平。可见,热痹模型滑膜基因存在独特的甲基化水平变化,而白虎加桂枝汤可能针对性回调热痹特征性基因的甲基化水平,达到治疗热痹的作用。  [关键词]热痹;DNA甲基化;湿热环境;白虎加桂枝汤  EffectofBaihuGuizhidecoctiononcharacteristi

4、cmethylationgenes  expressionofpyreticarthralgiaratmodel  CHENHuan1,2,JUShaohua1,2,WEIJiangping1,2,FUWenjun1,2,ZHENGHang1,2,XUShijun1,2*  (1ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine,Chengdu611137,China;  2KeyLaboratoryofSystematicResearchandExploitationofTraditionalChinese

5、MedicineResourcesinSichuanProvince,  Chengdu611137,China)  [Abstract]ToinvestigatethecharacteristicmethylationgenesofpyreticarthralgiamodelinhotanddampnessenvironmentandtheregulationeffectofBaihuGuizhidecoctiononthischaracteristicmethylationgenesPlantarinjectionofCFAwasusedinh

6、otanddampnessenvironmenttoinducethepyreticarthralgiaratmodelsFrom15thdayaftermodeling,BaihuGuizhidecoctionwasgivenfor30daysFootvolumewasdetectedevery4daysaftermodeling,andHEstainingwasusedtodetectthehistopathologyofallrats′anklejointatday45MeDIPSeqsequencingmethodwasusedtodete

7、ctthemethylationlevelofkneejointsynovial,andthemethodofdifferencesetswasusedtoscreenthecharacteristicmethylationgenesinpyreticarthralgiamodelsThecontentsofIL1β,IL17,TNFα,EGF,IL12p70,IL4,IL6andIFNγinserumweremeasuredbyusingsuspensionchipsThemRNAexpressionlevelofcharacteristicme

8、thylationgeneswasmeasuredbyqRTPCRTheresultssuggestedthatascom

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