特异性环氧化酶

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1、特异性环氧化酶〔摘要〕目的:探讨特异性环氧化酶（COX）2抑制剂rofecoxib对MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎的治疗作用及其机制。方法:将12只3月龄MRL/lpr自发狼疮小鼠随机均分为rofecoxib组和无药物干预的对照组，rofecoxib组予以rofecoxib10mg・kg-1・d-1。12周后分别测定各组小鼠尿蛋白排泄量、血肌酐水平；放射免疫法测定血清抗dsDNA抗体结合率、AngⅡ，尿TXB2、6KetF1α的变化；肾组织病理学检查及免疫组化测定肾组织COX2、TGFβ1蛋白的表

2、达。结果:12周后，rofecoxib组尿蛋白排泄量、血肌酐水平降低（P＜005)；肾小球细胞外基质明显减少(P＜005)；免疫组化结果表明，rofecoxib组肾组织内COX2、TGFβ1表达较对照组减少(P＜005)。rofecoxib组尿TXB2及血AngⅡ水平较对照组明显降低（P0.05），但两组血清抗dsDNA抗体结合率和尿6KetFla水平均无显著性差异(P>0.05)。结论:COX2抑制剂对自发狼疮小鼠肾损害有良好的治疗作用，能减少细胞外基质的聚积，降低蛋白尿，稳定肾功能，具

3、有保护肾脏的作用。　　〔关键词〕环氧化酶2抑制剂；狼疮性肾炎；转化生长因子β1；小鼠　　狼疮性肾炎(lupusnephritis,LN)是系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus,SLE)最常见的并发症，肾脏损害的程度是影响SLE预后的重要因素。SLE的发病与多种因素有关，近年有研究报道认为环氧化酶2(COX2)也是重要的炎症性介质，炎症部位的前列腺素（prostaglandin,PG）的合成增多是COX2过度表达的结果，PG也是重要的炎症性介质，增多的PG本身又激起

4、更多的炎症细胞聚积，加重局部的炎症反应，形成恶性循环。随着糖皮质激素、环磷酰胺、霉酚酸酯等免疫抑制剂在LN中的运用，LN治疗取得了长足的进步，但仍有部分患者治疗无效，而且易发生感染、肝肾毒性、骨髓抑制、肿瘤等，再加上停用后疾病易复发在很大程度上限制了其广泛应用〔1〕，促使人们寻求更为有效的办法来解决免疫抑制剂所带来的诸多问题。我们观察了MRL/lpr小鼠肾组织COX2的表达及选择性COX2抑制剂rofecoxib对MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎的治疗作用。　　1材料与方法　　11动物分组及治疗MR

5、L/lpr小鼠（12只，3月龄）购自中国科学院上海实验动物中心，体质量20～30g。将小鼠随机分成两组:（1）无药物干预对照组，6只，予同体积的05%羧甲基纤维素水灌胃12周；（2）rofecoxib组，6只,予含rofecoxib(10mg・kg-1・d-1)的05%羧甲基纤维素水灌胃12周。　　12尿蛋白、血清肌酐、抗dsDNA抗体结合率的测定采用代谢笼准确测量动物24h尿量，用考马斯亮蓝法测定尿蛋白排泄量。尿蛋白总量＞3mg・(24h)-1为蛋白尿。实验开始和结束时于各小鼠眶后静脉丛采血，

6、采用Jaffe法测血清肌酐水平，放射免疫法测定血清抗dsDNA抗体结合率（试剂盒由中国原子能研究院提供）。　　13血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、6酮前列腺素F1α（6KetF1α）、血栓烷B2（TXB2）的测定实验结束时采用放射免疫法测定AngⅡ、尿6KetF1α、尿TXB2浓度（试剂盒由解放军总医院科技开发中心放免所提供）。　　14肾组织常规病理分析处死动物后取肾组织，2%的福尔马林固定、脱水、石蜡包埋、制备3μm切片，经PAS、HE染色，行光镜检查，半定量〔2〕判断LN肾组织活动性指数（AI）及

7、慢性化指数（CI）。　　15肾组织COX2、TGFβ1蛋白检测兔抗鼠COX2、TGFβ1（博士德公司产品）为一抗，以PBS缓冲液替代一抗为阴性对照。二抗采用生物素标记的羊抗兔多克隆IgG，检测对照组、rofecoxib组肾组织COX2、TGFβ1蛋白的表达，切片经DAB显色。　　16计算机图像分析应用北航医学病理图像定量分析系统，通过光学显微镜放大400倍摄取图像，输入图像分析系统内。PAS片400倍下随机测定5~10个肾小球系膜基质，其增生程度以肾小球细胞外基质（ECM）面积与肾小球面积的比值

8、表示。高倍镜（400倍）下随机对选取视野内TGFβ1免疫组化阳性信号进行图像分析，计算对照组和各治疗组肾组织TGFβ1平均阳性表达率。每张切片随机选取10个肾小球，结果以肾小球中COX2阳性目标总面积/统计场总面积（面密度值）表示。　　17统计学处理数据以±s表示，两组计量资料比较采用t检验；尿TXB2与尿蛋白之间的关系采用直线相关分析。以上均由SAS软件完成。　　2结果　　21抗dsDNA抗体结合率、24h尿蛋白定量、血肌酐的测定实验开始时两组尿蛋白排泄量、血肌酐水平、抗dsDNA抗体结合率差