质粒dna的提取实验报告思考题

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1、今年以来我们在上级党组织的领导和区精神文明办的关心支持指导下坚持以邓小平理论和三个代表重要思想为指导认真落实科学发展观质粒dna的提取实验报告思考题篇一：质粒DNA的提取及其琼脂糖凝胶电泳实验报告及思考题　　1．实验目的：　　（1）通过本次实验学习和掌握碱裂解法提取质粒；　　（2）通过本次实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术；　　2．实验材料及用品　　（1）实验仪器（apparatus）：　　恒温培养箱（Constanttemperatureincubator）、恒温摇床（Constanttemp

2、eratureshakingtable）、高速离心机（Highspeedcentrifuge）、漩涡振荡器（Vortexmixer）、超净工作台（Bechtop）、高压灭菌锅（Autoclave）、微量加样器（Pipettes）、烧杯（beaker）、量筒（graduatedcylinder）、玻璃棒（stirbar）、微波炉（microwave）、天平（Panbalance）、电泳梳子（comb）、电泳槽（electrophoresistank）、电泳器（Electro-phoresisSystem）、

3、紫外灯（Ultraviolettransilluminator）　　3）、材料与试剂（Reagents）：　　①溶液I（SolutionⅠ）：　　50mmol/L葡萄糖；25mmol/L三羟基甲基氨基甲烷（Tris）Tris-HCl（pH8.0）；10mmol/紧紧围绕中心工作以创建区级文明单位活动为载体切实加强思想道德建设和企业文化建设深入开展群众性的精神文明创建活动今年以来我们在上级党组织的领导和区精神文明办的关心支持指导下坚持以邓小平理论和三个代表重要思想为指导认真落实科学发展观L乙二胺四乙酸（ED

4、TA）pH8.0　　溶液I可成批配制，每瓶约100ml，10磅高压蒸气灭菌15分钟，贮存于4℃。　　②溶液Ⅱ（SolutionⅡ）：新鲜配制，等体积混合　　0.2mol/LNaOH（临用前用10mol/L贮存液现用现稀释）；1%SDS（可用10％贮存液稀释配制）注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。　　③溶液III（SolutionⅢ，100mL)：加上后混匀会形成絮状沉淀　　60mL5mol/LKAc，　　11.5mL冰醋酸，　　28.5mLH2O（该溶液钾离子浓度为3mol/L，醋酸根离子浓度为5mo

5、l/L）　　④TE液缓冲液：10mmol/LTris-HCl（pH8.0）；1mmol/LEDTA（pH8.0）　　⑤70%乙醇；　　⑥平衡酚：氯仿1：1：　　将量取25mlTris-HCl（pH8.0）平衡苯酚，加入24ml氯仿和1ml异戊醇，充分混合后，移入棕色玻璃瓶中，4℃保存。　　⑦LB培养基：　　胰化蛋白胨10g紧紧围绕中心工作以创建区级文明单位活动为载体切实加强思想道德建设和企业文化建设深入开展群众性的精神文明创建活动今年以来我们在上级党组织的领导和区精神文明办的关心支持指导下坚持以邓小平理论

6、和三个代表重要思想为指导认真落实科学发展观　　酵母提取物5g　　NaCl15g　　pH7.0　　⑧琼脂糖（Agarose）；　　⑨1liter（升）5×TBE备用溶液（stocksolution）：　　54gtrisbase，27.5g硼酸（boricacid），20ml0.5mol/LEDTA,pH8.0；　　⑩6×凝胶加样缓冲液：　　0.25%溴酚蓝（bromophenolblue），40%蔗糖（sucroseinwater）；　　另外还有的试剂是：胰RNA酶、DNAMarker、硼酸、Gelview

7、试剂　　（2）实验材料：含有pUC19质粒的大肠杆菌等。　　3．实验原理：　　1）质粒DNA的提取：　　（1）关于质粒：紧紧围绕中心工作以创建区级文明单位活动为载体切实加强思想道德建设和企业文化建设深入开展群众性的精神文明创建活动今年以来我们在上级党组织的领导和区精神文明办的关心支持指导下坚持以邓小平理论和三个代表重要思想为指导认真落实科学发展观　　质粒是一类存在于几乎所有细菌中染色体之外（细胞质中）呈游离状态的双链、闭环的DNA分子。质粒通常携带有染色体上所不存在的能够表达产生抗生素、耐受重金属等重要性

8、状的基因。细菌质粒的大小范围从1kb至200kb以上不等，且拥有自己的复制起始位点，可不依赖于染色体而进行独立自主复制。一些小的质粒利用宿主细胞的酶进行复制，而较大的质粒则自身携有复制与编码的有关酶。　　（2）一般分离质粒DNA的方法都包括3个步骤：　　①培养细菌，使质粒DNA大量扩增；　　②收集和裂解细菌；　　③分离和纯化质粒DNA。　　分离制备质粒DNA的方法很多，其中常用的方法有碱裂解法、煮沸法、SDS法、羟基磷灰石层析