质粒dna的提取实验报告

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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划质粒dna的提取实验报告　　实验一、质粒DNA的提取及检测　　【实验目的】　　1、掌握碱裂解法提取质粒的原理和步骤　　2、掌握琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术　　3、学会PCR操作的基本技术　　第一部分质粒DNA的提取　　一、实验原理：　　碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。在pH值介于～这个狭窄的范围内，线性的DNA双螺旋结构解开而被变性，尽

2、管在这样的条件下，共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂，但两条互补链彼此相互盘绕，仍会紧密地结合在一起。当加入的乙酸钾高盐缓冲液恢复pH至中性时，共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链仍保持在一起，因此复性迅速而准确，而线性的染色体DNA的两条互补链彼此已完全分开，复性就不会那么迅速而准确，它们缠绕形成网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA，蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。　　二、仪器与试剂　　1、仪器恒温摇床、台式离心机目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的

3、巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　2、试剂溶液I、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ、无水乙醇、TE缓冲液、胰RNA酶、酚、氯仿　　三、实验步骤　　1、将2mL含相应抗生素的LB液体培养基加入到试管中，接入含pUC19　　质粒的大肠杆菌，37℃振荡培养过夜。　　2、取培养物倒入微量离心管中，4000r/min离心2min。　　3、吸去培养液，使细胞沉淀尽可能干燥。　　4、将细菌沉淀悬浮于100

4、μL溶液I中，充分混匀，室温放置10min。　　5、加200μL溶液Ⅱ，盖紧管皿，混匀内容物，将离心管放冰上5min。　　6、加入150μL溶液Ⅲ，盖紧管口，颠倒数次使混匀。冰上放置15min。　　7、1XXr/min，离心15min，将上清转至另一离心管中。　　8、向上清中加入等体积酚：氯仿，反复混匀，1XXr/min，离心5min，　　将上清转移到另一离心管中。　　9、向上清加入2倍体积无水乙醇，混匀后，室温放置5～10min。1XXr/min，离心5min。　　倒去上清液，把离心管倒扣在吸水纸上，吸干液体

5、。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　10、用1mL70℅乙醇洗涤质粒DNA沉淀，振荡并离心，倒去上清液，真空抽干或空气中干　　燥。　　11、加20μLTE缓冲液，其中含有20μg/mL的胰RNA酶，使DNA完全溶解，-20℃保存。　　第二部分琼脂糖凝胶电泳检测DNA　　一、实验原理：　　DNA分子在琼脂糖凝

6、胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正极方向移动。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即DNA分子本身的大小和构型。具有不同的相对分子质量的DNA片段泳动速度不一样，可进行分离。DNA分子的迁移速度与相对分子质量的对数值成反比关系。凝胶电泳不仅可分离不同相对分子质量的DNA，也可以分离相对分子质量相同，但构型不同的DNA分子。如

7、实验提取的pUC19质粒，有3种构型：超螺旋的共价闭合环状质粒DNA，开环质粒DNA，即共价闭合环状质粒DNA1条链断裂，线状质粒DNA，即共价闭合环状质粒DNA2条链发生断裂。这3种构型的质粒DNA分子在凝胶电泳中的迁移率不同。因此电泳后呈3条带，超螺旋质粒DNA泳动最快，其次为线状DNA，最慢的为开环质粒DNA。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安

8、保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　二、仪器与试剂　　1、仪器琼脂糖凝胶电泳系统、紫外线透射仪、电炉子　　2、试剂5×TBE、凝胶加样缓冲液、琼脂糖、溴化乙锭溶液　　三、实验步骤　　制备琼脂糖凝胶　　称取琼脂糖，放入锥形瓶中，加入10mL×TBE缓冲液，加热至完全溶化，摇匀，则为1℅琼脂糖凝胶液。　　胶板的制备　　1、取有机玻璃内槽，洗净，晾干。　　2、将有机玻璃内槽放置于一水