第一章环境监测中微生物学方法

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1、第一章环境监测中的微生物学方法当环境受到污染后，环境的物理性质化学性质生物学特性如：重金属离子、NO3-浓度增加；水体污染变质，水生生物种类减少，甚至灭绝；发生变化如何监测？化学方法：快速、定性定量反映污染物浓度，但为瞬时值；生物学方法：利用生物种类、数量的变化，生物学特性的改变来监测污染物对环境的影响。可监测到污染物对环境的综合影响，但不易精确反映污染物的性质、浓度和数量。一、空气微生物来源空气并非微生物的繁殖场所，空气中缺乏水分和营养，紫外线的照射对微生物也有致死作用。土壤中飞扬起来的灰尘；水面吹起的水雾、人和动物体表干燥脱落的物质，微生物附着于这些物质的微粒上随气流传播。第一节空气的

2、卫生学检验微生物产生的孢子本身也可以飘浮到空气中，形成“气溶胶”，借风力传播。空气中的微生物中，真菌的孢子数量最多，细菌较少。而且藻类、酵母菌、病毒都会存在于空气中。二、空气微生物的卫生标准目前，还无统一的关于空气的卫生学指标，一般以室内1m3空气中细菌总数为50~1,000个以上作为空气污染的指标。病原菌在空气中一般很易死亡，但结核菌、白喉杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、炭疽杆菌、流感病毒和脊髓灰质炎病毒等，也可以在空气中存活一段时间。尘埃多的地方，如畜舍、公共场所、医院、城市街道的空气中，微生物数量较多。高山、海洋、森林、积雪的山脉和高纬度地带的空气中，微生物较少。场所畜舍宿舍城市

3、街道市区公园海洋上空北纬80º微生物(1~2)1062×1045×1032001~20表2-1不同场所上空微生物的数量（个/m3）表2-2以细菌总数评价空气的卫生标准（个/m3）清洁程度细菌总数最清洁的空气（有空调）1~2清洁空气<30普通空气31~125临界环境~150轻度污染<300严重污染>301三、空气的微生物监测通常采用营养琼脂平板计数法。我国检测空气微生物所用的培养皿直径为d90mm，有用d100mm的。评价空气的清洁程度，需要测定空气中的微生物数量和空气污染微生物。测定的细菌指标有细菌总数和绿色链球菌，在必要时则测病原微生物。(一)空气微生物的测定方法1．固体法固体法有平皿

4、落菌法(沉降—平板法)、撞击法(有缝隙采样器、筛板采样器、针孔采样器)和过滤法。(1)平皿落菌法：将营养琼脂培养基融化倒人d90mm无菌平皿中制成平板。将它放在待测点(通常设5个测点)，打开皿盖暴露于空气5~10min，以待空气微生物降落在平板表面上，盖好皿盖，置于培养箱中培养48h后取出计菌落数，即为落菌数。可通过前苏联奥梅梁斯基公式换算出浮游细菌数。奥氏认为：5min内落在面积100mm2营养琼脂平板上的细菌数和10L空气中所含的细菌数相同。奥氏公式：式中：C—空气细菌数；A——捕集面积，cm2；t——暴露时间，min；N——菌落数，个。5t100A100010×N××C=简化后的奥氏

5、公式：经测定发现，用奥式公式计算的浮游细菌数比实测的浮游细菌少。此公式没有考虑尘埃粒子大小、数量、气流情况、人员密度和活动情况。C=1000×50NA×t(2)撞击法：以缝隙采样器为例，用吸风机或真空泵将含菌空气以一定流速穿过狭缝(狭缝宽有0.15mm、0.33mm和1mm三种)而被抽吸到营养琼脂培养基平板上。狭缝长度为平皿的半径，平板与缝的间隙有2mm，平板以一定的转速(1r／min、5-60r／min、60r／min)旋转。通常平板转动一周，取出置于37℃恒温箱中培养48h，根据空气中微生物的密度可调节平板转动的速度。采集含菌高的空气样品时，平板转动的速度要比含菌量低的空气样品的转速快

6、。根据取样时间和空气流量算出单位空气中的含菌量。采样器的规格各国不一，可按说明书操作。撞击法检测空气中微生物数量培养前培养后2液体法液体法用于测定空气中的浮游微生物，主要是浮游细菌。该法将一定体积的含菌空气通入无菌蒸馏水或无菌液体培养基中，依靠气流的洗涤和冲击使微生物均匀分布在介质中，然后取一定量的菌液涂布于营养琼脂平板上，或取一定量的菌液于无菌培养皿中，倒入15-18ml融化(45℃)的营养琼脂培养基，混匀，待冷凝制成平板，置于37℃恒温箱中培养48h，取出计菌落数。再以菌液体积和通入的空气量计算出单位体积空气中的细菌数。例如：将10m3含菌空气通入100mL的无菌水中，使10m3空气中

7、的微生物全部截留在100mL水中。然后取0.1mL菌液涂布于平板上，若长出100个菌落，10mL水中共含菌10,000个，则10m3空气含有10,000个。1m3空气含有1,000个。(二)空气微生物的检测点数空气微生物的测点数越多越准确，为照顾到工作方便，又相对准确，以20~30个测点数为宜，最少测点数为5~6，见表。时间标准名称最少测点数建议测点数点距（m）每点测定次数1987JISB9920洁净室中浮游粒子测定方法