黑曲霉诱导子促进岩黄连悬浮细胞中生物碱的合成

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1、黑曲霉诱导子促进岩黄连悬浮细胞中生物碱的合成：程华张玉芹余龙江敖明章【摘要】目的为了提高岩黄连悬浮培养细胞中生物碱的产量。方法以不同浓度黑曲霉诱导子处理岩黄连悬浮培养细胞。结果生物碱的产量随着诱导时间的延长迅速提高，到第6天达到最大值；添加50mg/L诱导子时生物碱产量最高，达到89.2mg/L，比对照组高出2.5倍，当诱导子浓度进一步升高时，生物碱产量反而降低；随着诱导子浓度从0mg/L增大到150mg/L，细胞生物量反而逐渐减少。结论黑曲霉诱导子可促进岩黄连细胞中生物碱的合成，最佳诱导子浓度是50mg/L；过高浓度的诱导子并不利于细胞生长和生物碱合成，细胞生物量的减少是

2、导致生物碱产量下降的一个重要原因。该处理提供了一种简单有效的方法提高岩黄连细胞培养中生物碱的产量。【关键词】黑曲霉悬浮细胞培养岩黄连诱导子　　Abstract：ObjectiveToimprovetheproductionofalkaloidsinCorydalissaxicolaBuntingsuspensioncellcultures.MethodsElicitorpreparedfromAspergillusnigereaftertreatmentandthegreatestvalueofalkaloidproductiong/Lelicitorgeneratedth

3、ehighestalkaloidproduction,89.2mg/L,50mg/Lto150mg/L.0to150mg/L,biomassofculturesinverselydecreased.ConclusionThiselicitoriseffectivetoenhancealkaloidbiosynthesisincellsuspensionculturesofC.saxicolaandtheoptimalconcentrationforalkaloidbiosynthesisis50mg/L.Higherconcentrationoftheelicitorisu

4、nfavorabletonotonlycellgroassinducedbyhigherconcentrationofelicitorisamainreasonforthesuppressionofalkaloidproduction.ThistreatmentprovidesasimpleandeffectiveapproachtoenhancealkaloidbiosynthesisofC.saxicolacells.　　Keydeo等［5］利用黑曲霉诱导子提高了长春花细胞培养物中阿吗碱的产量。利用真菌诱导子激活植物细胞中的代谢途径已经成为提高植物细胞培养中目标产物产量

5、的有效手段之一［4］。　　岩黄连（CorydalissaxicolaBunting），紫堇科紫堇属植物［6，7］，多年生草本。全草含脱氢卡维丁（dehydrocavidine）、小檗碱（berberine）等多种活性成分［8］；具有显著的抗菌、消炎、镇痛和强安定作用，在民间作为治疗乙肝的特效药。我们已经建立岩黄连悬浮细胞培养体系［9］，为了提高培养物中生物碱的产量，本文以黑曲霉诱导子处理岩黄连悬浮培养细胞，研究其对生物碱合成和细胞生长的影响，发现黑曲霉诱导子能有效促进悬浮细胞中生物碱的合成。　　1材料与方法　　1.1材料岩黄连细胞培养参考文献［9］方法。悬浮培养采用250m

6、l三角瓶培养，每瓶装培养基100ml，接种后（25±1）℃恒温条件下（130±5）r/min摇床培养，细胞接种密度为10g/100ml(Fl75%酸性乙醇，超声提取3次，1h/次，抽滤，取滤液1ml，加入0.1mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(pH=5.4)5ml，以2ml0.05%溴甲酚绿作为显色剂，加入10ml三氯甲烷萃取30min，取有机相，加入适量无水Na2SO4脱水，用分光光度计在416nm处测定其光吸收值；量取1ml培养液，再以同样方法处理，取有机相测定光密度。以小檗碱作为标准品标示生物碱含量，所测得的生物碱的含量为细胞和培养液中生物碱含量之和。　　1.4细胞生

7、长测定以细胞干重作为细胞生长的指标，测定方法同前。培养物经布式漏斗抽滤，用蒸馏水将残留的培养液冲洗干净，再次抽滤得到细胞鲜重（Fg/L诱导子时岩黄连细胞培养中生物碱的合成情况。从图中可以看出，生物碱的产量随着诱导时间的延长迅速提高，到第6天达到最大值，此时比对照组高出2.5倍，之后生物碱产量缓慢降低。对照组中生物碱的产量在整个培养过程中逐渐升高，至培养末期(第9天)达到最高。　　2.2诱导子浓度对生物碱产量的影响结果见图2。　　图2诱导子浓度对生物碱产量的影响（略）　　2.3诱导子对岩黄连细胞生长的影响添加诱导子对