联合用药对呼吸道合胞病毒的抑制作用

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1、联合用药对呼吸道合胞病毒的抑制作用[]目的探讨联合用药对呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用。方法将单磷酸阿糖腺苷(Ara-AMP)、病毒唑及柴胡分别稀释成不同的浓度，用细胞培养法观察药物的细胞毒性反应：采用Vero细胞先感染病毒2h后给药法观察细胞病变(CPE)和药物对RSV的抑制作用。结果Ara-AMP、病毒唑及柴胡对Vero细胞的毒性剂量(TD)分别为0.25、0.2、2mg/ml；当Ara-AMP、病毒唑分别与柴胡联用时并未增加对细胞的毒性，而Ara-AMP与病毒唑联用时则对细胞的毒性增加；3种药物各自在Vero细胞上对RSV都有抑制作用.Ara-AMP和病毒唑的有效剂量均为25μ

2、g/ml，柴胡为125μg/ml。当3种药物配伍联合应用时，均可产生协同作用。结论Ara-AMP、病毒唑及柴胡各自对RSV具有显著的抑制作用，它们的联合应用可产生显著协同作用，既可降低用药量，减少毒副反应，又可有效抑制RSV的感染。　　[关键词]呼吸道合胞病毒；阿糖腺苷磷酸盐；病毒唑；柴胡　　[]R373.1[]A[]1005-0515（2011）-11-058-01　　　　呼吸道合胞病毒(RSV)是婴幼儿下呼吸道感染的重要病原，严重危害婴幼儿的健康[1]。长期以来，临床上并无特效的抗RSV药，因此，筛选某些化学药物及抗生素制剂用于RSV感染的治疗有重要意义。　　1材料与方法　　1.1材

3、料及Vero细胞及RSV-Long株由衡阳市中心医院病毒室提供：RSV-Long株在Vero细胞上传代，病毒滴度为106TCID50/0.1ml，实验时用100TCID50/0.1ml。单磷酸阿糖腺苷(Ara-AMP)由广东省药物研究所制药厂生产，每支200mg；病毒唑注射液由武汉第二制药厂生产，每支100mg；柴胡注射液由河南淅川制药厂生产，每支2g。　　1.2药物的细胞毒性反应将生长良好Vero细胞管分成不同剂量的9个实验组，即：Ara-AMP、病毒唑、柴胡、0.125m/ml的Ara-AMP分别加不同浓度的柴胡和病毒唑、0.1m/ml的病毒唑分别加不同浓度的Ara-AMP和柴胡、1

4、mg/ml的柴胡分别加不同浓度的Ara-AMP和病毒唑，同时设正常细胞对照组。倾去营养液，加入不同稀释度的药物，每个稀释度2管，补足维持液至lml，35℃静置培养，与正常细胞相比较，每天观察细胞病变(CPE)，于第3天判定初次结果，第5天判定终结果。　　1.3药物对RSV的抑制作用将Vero细胞管分成Ara-AMP、病毒唑、柴胡3个单项药物对RSV的抑制组，另设Ara-AMP加病毒唑、Ara-AMP加柴胡及病毒唑加柴胡联合用药3个组，共6组实验。弃去培养液，接种100TCID50的RSV0.1ml，随即将不同稀释度和不同配比的各种药物各0.1m1分别加入6个实验组的细胞管，每个稀释度2管

5、，补足维持液至lml，同时设病毒和正常细胞对照组，于感染后第7天判定结果，当病毒对照的CPE达(75％)时，实验组的CPE不超过的药物浓度判定为该药50％的抑制浓度(ID50)为有效剂量，以比较各种药物抑制RSV的强度。　　1.4药物抑制RSV的时机选择将生长良好的Vero细胞接种100TCID50的RSV0.1ml，于感染的同时及感染后2、12、24、36h，分别加入各稀释度的不同药物，每稀释度2管，同时设病毒和细胞对照，补足维持液至lml，35℃培养，结果判断同1.3。　　2结果　　2.1药物的细胞毒性反应(见表1)：单用剂量为0.5mg/ml的Ara-AMP时Vero细胞出现毒性反

6、应，减至0.25mg/ml时，于第5天出现毒性，当剂量降至0.125mg/ml时，于第5天观察，未发现细胞毒性。单用病毒唑时，0.2mg/ml的浓度即可导致细胞出现毒性反应，而0.1mg/ml浓度时则无细胞毒性。柴胡以2mg/ml的浓度单用时出现细胞毒性，而lmg/ml的浓度时则无毒性反应。当0.125mg/ml的Ara-AMP和lmg/ml柴胡联用时，对细胞的毒性并未增加，而当它与0.1mg/ml的病毒唑联用时，对细胞的毒性增加，于第3天观察即出现细胞毒性。当0.1mg/ml病毒唑与lmg/ml的柴胡联用时.对细胞的毒性没有增加，到第5天时对细胞无毒性作用。　　表1药物的细胞毒性反应　

7、　2.2药物对RSV的抑制作用联合用药时Ara-AMP加病毒唑对RSV的抑制作用明显增强，如病毒唑l2.5g/ml加3.125μg/mlAra-AMP的剂量就可对RSV发生作用[2]。这既可减少药物的用量，降低毒性反应，又可增强抑毒作用，是较理想的配比。这一特点在其他两组联合用药中也表现很明显。　　2.3药物抑制RSV的时机选择当细胞被RSV100TCID50/0.1ml感染后，在感染的同时及感染后2、12h，向细胞管内分别加Ara