实验 -薄层色谱法

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1、2021/7/271实验3薄层色谱法2021/7/2721.了解色谱分离的原理及其应用。2.初步掌握薄层色谱的操作技能。目的和要求2021/7/273色谱法概述1938年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一种天然药物。1965年德国化学家出版了“薄层色谱法”一书，推动了这一技术的发展。2021/7/274色谱法（Chromatography）亦称色层法、层析法等。色谱法是分离、纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一。色谱法的基本原理是利用混合物各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（分配）的不同，或其亲和性的差异，使混合物的溶液流经该种物质进行反复的吸附或分配作用，从而使各组分分离。

2、色谱法原理2021/7/2751.按固定相所处的状态分类：薄层色谱（ThinLayerChromatography）柱色谱（ColumnChromatography）纸色谱（PaperChromatography）2.按分离机理分类：吸附色谱（AdsorptionChromatography）分配色谱（PartitionChromatography）离子交换色谱（IEC）凝胶色谱（GPC）分类2021/7/2766如上色谱都属吸附色谱类型，用固体吸附剂作固定相，以不同溶剂作流动相，依据样品中各组分在吸附剂上吸附性能的差别来实现分离仪器分析实验高效液相色谱(HPLC)气相色谱(G

3、C)2021/7/277色谱法三要素吸附剂（固定相）：用于与样品发生吸附作用的固定不动的物质。在混合物样品流经固定相的过程中，由于各组分与固定相吸附力的不同，就产生了速度的差异，从而将混合物中的各组分分开。2021/7/278⑴氧化铝（alumina）氧化铝的吸附活性来源于铝原子上未成键电子对。氧化铝的活性与含水量有关，含水量越低，活性越大，吸附力越强。无水氧化铝吸附活性特别强。根据氧化铝的含水量可将氧化铝的活性分为五级。吸附色谱三要素－吸附剂2021/7/279*酸性氧化铝（pH＝5-4），适用于分离酸性化合物和对酸稳定的中性化合物，如酚类物质和某些氨基酸类等。*中性氧化铝（

4、pH＝7.5），适用与分离生物碱、挥发油、萜类、甾类、蒽醌以及在酸碱中不稳定甙类、酯、内酯等化合物。凡是能用酸性或碱性氧化铝层析分离的物质，中性氧化铝也都适用。*碱性氧化铝（pH＝9-10），适用于碱性，如生物碱和中性化合物的分离。吸附色谱三要素－吸附剂2021/7/2710⑵硅胶silicagel它的吸附性来源于硅胶氧原子上未成键的电子对和可以形成氢键的羟基。羟基有结合型（Ⅰ）、活性型（Ⅱ）和游离型（Ⅲ）三种吸附色谱三要素－吸附剂2021/7/2711活性氧化铝含水量（％）硅胶含水量（％）Ⅰ00Ⅱ35Ⅲ815Ⅳ1025Ⅴ1538吸附色谱三要素－吸附剂2021/7/2712洗脱

5、剂（流动相）：也称展开剂，在色谱过程中起到将吸附在固定相上的样品洗脱的作用。乙酸>吡啶>水>醇类（甲醇>乙醇>正丙醇）>丙酮>乙酸乙酯>乙醚>氯仿>二氯甲烷>甲苯>环己烷>正己烷>石油醚*从前到后-洗脱能力降低。2021/7/2713试样：在给定的条件下，各个成分的分离情况，与被分离物质的结构和性质有关，对极性吸附剂而言，被分离物质的极性越大，两者吸附作用也越强。具有极性基团的化合物，其吸附能力按下列顺序增加：Cl,Br,I

6、2021/7/2714在吸附层析中，试样、洗脱剂和吸附剂三者关系。它们三者的关系如下图。Stahl简图（1）离化合物的极性；（2）吸附剂的活度；（3）展开剂的极性。若将这三个因素各自固定在圆周的三分之一，转动圆盘正中的三角形，如果角A指向极性物质，则角B指向活度小的吸附剂，角C就指向选用极性展开剂；A’,B’,C,处则是合理的选择组合。15有机化学中的应用*分离混合物：一些结构类似、理化性质也相似的化合物组成的混合物，一般应用化学方法分离很困难，但应用色谱法分离，有时可得到满意的结果。*精制提纯化合物：有机化合物中含有少量结构类似的杂质，不易除去，可利用色谱法分离以除去杂质，得

7、到纯品。2021/7/2716*鉴定化合物：在条件完全一致的情况，纯粹的化合物在薄层色谱呈现一定的移动距离，称比移值（Rf值），所以利用色谱法可以鉴定化合物的纯度或确定两种性质相似的化合物是否为同一物质。*跟踪一些化学反应进程：可以利用薄层色谱或纸色谱观察原料色点的逐步消失，以证明反应完成与否。2021/7/2717薄层色谱薄层色谱又叫薄板层析，是色谱法中的一种，是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，属固-液吸附色谱，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点，一方面适用于少量样品（几到几微