降血糖动物实验

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1、辅助降血糖作用检验方法1动物实验1.1动物选择选用健康成年动物，常用小鼠（25±2g）或大鼠（180±20g）:单一性别，大鼠每组8-12只、小鼠每组10-15只。1.2材料1.2.1试剂四氧（1密徙（或链脈霉素）小鼠35-50mg/kg.bw.iv（100-16011^/1<§上^卩）、大親50-800^/1^上¥」¥（200-250mg/kg.bw.ip）用新鲜配制。血溏测定试纸或试剂盒。1.2.2仪器血糖仪、全自动生化仪、721-B型分光光度计。1.3剂量分组及受试样品给予时间设1个溶剂对照组和3个受试样品剂量组，根据人体每

2、日每公斤体重推荐摄入量，小鼠扩大10倍作为其中一个剂量组（大鼠扩大5倍），根据受试样品的具体情况另设两个剂量组。受试样品给予时间原则上不少于30天，也可根据实验需要自行设定期限。1.4实验方法1.4.1降低空腹血糖实验1.4.1.1高血糖模型动物1.4.1.1.1原理叫氧嘧啶（或链脲霉素）是一种P细胞毒剂，可选择性地损伤多种动物的胰岛P细胞，造成胰岛素分泌低下引起实验性糖尿痫。1.4.1.1.2造型动物禁食24小吋后，给予叫氧嘧啶造型，5-7天后禁食3-5小吋，测血糖，血糖值10-25minol/L为高血糖模型成功动物。1.4.1.1

3、.3操作步骤选高血糖模型动物按禁食3-5小时的血糖水平分组，随机选1个模型对照组和3个剂量组（组间差不大于l.lmmol/L）。剂量组给予不同浓度受试样品，模型对照组给予溶剂，连续30天，测空腹血糖值（禁食同实验前），比较各组动物血糖值及血糖降低的绝对值（即实验前后血糖的差值）。1.4.1.2正常动物选健康成年动物按禁食3-5小时的血糖水平分组，随机选1个对照组和1个受试样品组（高剂量）。余操作同1.4.1.1.3。1.4.2糖耐量实验高血糖模型动物禁食3-5小吋，剂量组给予不同浓度受试样品，模型对照组给予同体积溶剂，15-20分钟后

4、经口给予葡萄糖2.0g/kg或医用淀粉3-52.0g/kg,测定给葡萄糖后0、0、5、2小时的血糖伉或人医用淀粉后0、1、2小时的血糖值，观察模型对照组与受试样品组给葡萄糖或医用淀粉后各时间点血糖曲线下而积的变化。血糖曲线下而积=1/2X（0小时血糖值+0.5小时血糖伉）X0.5+1/2X（2小时血糖伉+0.5小时血糖伉）X1.5=0.25X（0小时血糖值+4X0.5小时血糖值+3X2小时血糖值）.1.5数裾处理及结果判定一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F侪降空腹血糖实验：受试样品剂量组与对

5、照组比较，空腹血糖实测值降低有统计学意义,可判定该受试样品降空腹血糖实验结果阳性。糖耐量实验：受试样品剂量组与对照组比较，在给葡萄糖或医用淀粉后、0.0、0.5、2.0小时血糖曲线下而积降低有统计学意义，可判定该受试样品糖耐:k实验结果阳性。1.6注意事项1.6.1为了使实验动物糖代谢功能状态尽量保持一致，也为了准确地按体重计算受试样品的用量，实验前动物应严格禁食（不禁水），实验前后禁食条件应一致，鼠类在禁食的同时应更换衬垫物。1.6.2血糖测定用试纸或试剂盒，按说明书操作；若向行配制试剂，按［附11操作。1.6.3如用血清样品进行测

6、定，应于取血后30分钟内分离血清，分离后血清的含糖量在6小时內不变。用血清制备的无蛋白血滤液可保存48小时以上。1.6.4高浓度的还原性物质如VitC亦能与色素原竞争游离氧，干扰反应，使结果偏低。血红蛋白能使过氧化氢过早分解，亦干扰反应，致使测得血糖伉偏低。故对已溶血的全血或血清必须制备无蛋白滤液后，再进行测定。f附11血糖伉测定方法1原理葡萄糖氧化酶是一种需氧脱氢酶，能催化葡萄糖生成葡萄糖酸和过氧化氢，后者在过氧化物酶作用下放出氧，使4-氨基安替比林与酚氧化缩合，生成红色醌类化合物，可在波长505nm比色测定。2试剂配制磷酸盐缓冲液

7、（0.2mol/L,PH7.0）0.2mol/LNa2HPO461ml,0.2mol/LKH2HPO439ml混合即可。酶试剂葡萄糖氧化酶400u,过壌，化物酶0.6mg，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠lOOmg加磷酸盐缓冲液至100ml,PH调至7。冰箱存放至少可稳定2个月。酚试剂酚lOOmg溶于100ml蒸馏水屮。酶混合试剂取等量酶试剂和酚试剂混合。在冰箱中可存放1个月。葡萄糖标准液储存液：无水D-葡萄糖(A.R.)在烤箱中80°C烤4小时，冷却后，存放于干燥器中至恒重。精确称取2g以0.25%苯甲酸溶液溶解并移入100ml容M

8、瓶屮，再用苯甲酸溶液稀释至lOOmlo应用液：在100ml容量瓶屮准确加入储存液5ml，再用0.25%苯甲酸溶液稀释至100ml,即lmg/mL应用液。蛋白沉淀剂溶解磷酸氢二钠10g、钨酸钠10g、氯化钠9g于800ml