一种病毒性哮喘模型制作方法的建立及评价

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1、一种病毒性哮喘模型制作方法的建立及评价【摘要】目的评价用呼吸道合胞病毒(RSV)诱导鸡卵白蛋白(OVA)致敏，建立小鼠急性病毒性哮喘模型的方法及效果。方法BALB/c小鼠100只，随机分为磷酸盐缓冲液(PBS/PBS)对照组、PBS/RSV组、RSV/RSV组、OVA/PBS组和OVA/RSV组5组。应用OVA多点注射致敏、OVA气道雾化吸入结合RSV滴鼻激发复制急性病毒性哮喘模型。观察小鼠哮喘急性发作症状；动物体描箱法测定乙酰胆碱(Ach)激发条件下气道反应性(以肺阻力RL表示)；支气管肺泡灌洗液(BALF)作细胞分类计数；HE染色观察肺组织

2、病理变化。结果①以45、135、405μg/mLAch激发时，与其他各组比较，OVA/RSV组RL均显著升高(P均<0.01)；②BALF中炎性细胞分类计数，与其他各组比较，OVA/RSV组的细胞总数、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞均显著升高(P均<0.01)；③OVA/RSV组的肺组织病变程度重于其他各组(P均<0.01)。结论RSV诱导OVA致敏的方法建立小鼠急性病毒性哮喘模型是成功的。【关键词】呼吸道合胞病毒支气管哮喘急性模型方法及评价　　ABSTRACT:ObjectiveToreproduceatypeofacu

3、teviralasthmamodelinovalbumin(OVA)sensitizedBALB/cmicebyinductionicelydividedintofivegroups:PBS/PBScontrolgroup,PBS/RSVgroup,RSV/RSVgroup,OVA/PBSgroupandOVA/RSVgroup.TheasthmamodelultipointintraperitonealinjectionofOVA,folloLin50μL).Asthmaticsymptomsulatedbyacetylchdine(Ach

4、);Cellsinbronchoalveolarlavagefluid(BALF)ulatedL)(P<0.01,respectively).AsthmasymptomsoresevereinOVA/RSVgroupparedberoftotalcellularscore,lymphocytes,eosinophils,andneutrophilsinOVA/RSVgroupalmodelofacuteviralasthmamodelissuccessfullyreproducedbynasalinoculationice.　　KEYEM

5、中37℃、50mL/LCO2条件下培养，细胞长满单层后，RSV接种Hep2细胞，继续在含20mL/L小牛血清的DMEM中培养，待细胞病变完全时收获病毒，存于-70℃冰箱中，4℃反复冻融3次，4℃2500r/min离心8min，取上清备用。参照文献[6]的方法采用半数细胞感染量法(ReedMuench法)测定病毒滴度，取效价为1.0×106.5TCID50/mL的RSV备用。　　1.4实验方法　　1.4.1动物分组及哮喘模型制备参照文献[4-5]的方法并加以改良建立急性哮喘模型。OVA/RSV组于第1天、第8天背部皮下、腹腔注射致敏液0.2m

6、L(1.0g/LOVA0.1mL和0.2g/L氢氧化铝凝胶0.1mL混合)；第14-27天将小鼠置于透明密闭容器中以50g/LOVA溶液20mL雾化吸入激发，每次20min，1次/d；第28、31、34天用3g/L戊巴比妥0.3mL/只，腹腔注射麻醉小鼠后，用效价为1.0×106.5TCID50/mLRSV50μL鼻腔滴入；第29、30、32、33天继续以50g/LOVA溶液20mL雾化吸入激发，每次20min，1次/d。PBS/RSV模型组上述时点用PBS进行致敏、激发，并在气道内滴入RSV。RSV/RSV模型组于上述时点用0.2mLPBS溶

7、液(含效价为1.0×106.5TCID50/mLRSV50μL和0.2g/L氢氧化铝凝胶0.1mL)进行致敏、PBS吸入激发并在气道内滴入RSV。OVA/PBS模型组于上述时点用OVA进行致敏、吸入激发，并在气道内滴入PBS50μL。PBS/PBS对照组小鼠于上述时点用PBS进行致敏、激发并在气道内滴入PBS。每日观察小鼠症状。于最后1次滴鼻24h后测定相关指标。　　1.4.2气道反应性的测定5组各取6只小鼠，戊巴比妥钠麻醉，气管切开后，套管针置入，固定。用4号半头皮针行尾静脉穿刺，含乙酰胆碱(Ach)溶液的注射器连接备用。将小鼠放入密闭的体描

8、箱中,吸气管、呼气管、测压管等按指示连接。小鼠按频率90次/min、潮气量5-6mL/kg用动物呼吸机行机械通气，调节呼气末压为-8cmH2O(1cm