颅内动脉瘤信号传导相关基因的筛选

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1、颅内动脉瘤信号传导相关基因的筛选：石忠松，李明昌，孙毅明，朱永华，戴华浩，潘伟生，黄正松【摘要】　　【目的】基因芯片技术建立颅内动脉瘤患者血液单核细胞基因表达谱，筛选与信号传导相关的基因表达情况。【方法】50例颅内动脉瘤患者外周血，10例正常成人作为对照组，分离血液单核细胞，提取总RNA，与含22215个人类基因的Affymetrix寡核苷酸基因芯片杂交、洗脱、染色和扫描，分析检测的数据。荧光定量RT-PCR验证芯片结果。【结果】检测的22215个基因中，颅内动脉瘤共差异表达的基因有325个，差异水平均达2倍以上的基因有35

2、个，生物信息学分析发现信号传导相关基因有7个，其中上调基因5个，下调基因2个。【结论】血液单核细胞基因表达谱是研究颅内动脉瘤发病机制的新策略，多个信号传导相关基因参与颅内动脉瘤的形成和发展。【关键词】颅内动脉瘤;白细胞，单核;基因表达谱;信号传导；基因芯片Abstract:【Objective】Toidentifysignaltransduction-relatedgenesinperipheralbloodmononuclearcellsfromintracranialaneurysmpatientsusingoligo-

3、microarrays.【Methods】Bloodsamplesfrom50intracranialaneurysmsand10healthyhumandonorsedconsent.Peripheralbloodmononuclearcells(PBMC)bloodusingFicollmethod.ThecDNAtheextractedRNAandthebiotin-labeledcRNAderivedfromthetranscriptionofcDNAentedasprobes.Then,theprobesetrix

4、HumanGenomeU133AArray.GeneArrayScannerintracranialaneurysmpatientsparedtohealthyhuman.Functionanalysisedfrom21upregulatedgenesand14doongthesegenes,thereare7genesinvovledinsignaltransduction.【Conclusions】ThemethodologiesofgenechipofPBMCsolecularmechanismsofintracran

5、ialaneurysm.SignaltransductionmaybethepossiblemechanismforthepathogenesisofintracranialaneurysmsinChinese.Key;leukocytes,peripheralbloodmononuclearcell;geneexpressionprofile;signaltransduction;genechip近年基因芯片技术在人类疾病诊断、发病机制及疾病易感性研究中起到重要作用[1]，在血管性疾病如主动脉瘤的发病机制研究中也逐渐有应用

6、基因芯片技术的报道[2]。颅内动脉瘤的发病机制目前尚不明确，我们前期对手术切除的颅内动脉瘤组织标本进行基因芯片研究，初步建立国人颅内动脉瘤组织基因表达谱[3]。本研究利用较充足的血液遗传信息库，进一步探讨国人颅内动脉瘤患者外周血单核细胞（PBMC）基因表达谱，发现了一些颅内动脉瘤可能致病相关基因群，其中多个基因与信号传导机制密切相关，为阐明颅内动脉瘤的发生机制和寻求早期诊断分子标记物提供了新线索，现报告如下。1材料和方法1．1颅内动脉瘤患者PBMC的分离50例患者均经数字减影脑血管造影诊断为颅内囊性动脉瘤，年龄32～63岁，

7、男性24例，女性26例，分别采集其2mL外周血。每10例患者随机组合为一组，另取10名体检正常的成人健康志愿者作为对照组，每组将已分离的PBMC混合后提取RNA。Ficoll密度梯度离心法分离PBMC，简述如下：2mL外周血加入EDTA抗凝剂，用半径为16cm的水平离心机以1500r/min离心20min，弃上清血浆，加入2mL淋巴细胞分离液，1500r/min离心20min，吸取中间层的单核细胞，1500r/min离心5min，去上清后加入0.3mLRNALater，－80℃保存用以抽提RNA。1．2试剂、基因芯片及主要设

8、备TRIzol试剂盒、RNeasyMiniKit（Qiagen公司，德国）、T7-(dT)24引物、dNTP（Promega公司，美国）、SuperScriptⅡ逆转录酶（Invitrogen公司，美国）、DNAligase、DNA多聚酶Ⅰ、RNA酶H(Invitrogen公司，美国；ME