外周血染色体考核

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1、外周血染色体收获（考核）一．实验前准备1、检查是否有足够的0.075MKCl、甲醇、乙酸、秋水仙素和玻片2、检查水浴箱的温度是否37℃3、记录当天的温度和湿度4、37℃预温低渗液5、打印当天收获的病人名单二．实验1、加入50g/mL的秋水仙素，充分摇匀2、放入37℃培养箱继续培养12min3、离心1500转/分6分钟4、去上清，震荡器混匀，加入0.075M氯化钾溶液8mL，加盖，颠倒混匀5、37℃水浴，如湿度高于35%温育20分钟，如湿度低于35%则温育25分钟6、预固定：去上清，震荡混匀，加入新鲜的预固

2、定液（甲醇：冰醋酸=95:5）5mL，加盖，轻轻混匀。7、离心1500转/分6分钟8、弃去上清后，震荡混匀悬液，加入预先冰冻过的固定液9mL，加盖，颠倒混匀9、室温放置30分钟10、离心1500转/分6分钟11、弃去上清后，震荡混匀悬液，加入固定液9mL，加盖，颠倒混匀12、放入4℃冰箱过夜13、实验用具归位，工作区域消毒清洁第一次固定之前，预先把配好的3:1固定液放4℃冰箱冰冻后再加入，效果更好些标本接种量多少（接种培养基种类、为何两瓶）、最佳温度、湿度（接种、滴片、显带）标本污染如何处理滴片注意问题（

3、滴片的标本数量、镜检不出现核型及多少个核型为佳）染色如何选择、改变胰酶处理以及吉姆萨工作液染色时间预固定试剂也可选择3:1，如何根据实验室条件选择比例烤片的温度以及时间PBS缓冲液成分分析阅片：镜下计数20个核型，分析5个核型，电子核型图片保存两张外周血染色体滴片（考核）一．实验前准备：玻片清洁1、洗洁精擦拭每张玻片2、清水冲洗每张玻片3、蒸馏水冲洗玻片，无水乙醇浸泡3小时以上4、蒸馏水冲洗、浸泡、放4℃冰箱备用二．实验1、将冰箱过夜的标本离心1500转/分6分钟2、弃去上清，根据细胞沉淀，留1-2mL的

4、上清，轻轻混匀3、对光检查细胞悬液的情况，如较浑浊则加入数滴固定液，至悬液变成半透明状，如细胞悬液非常清澈，切勿再加入固定液4、每份标本必须接种两种不同培养基，滴片时首先将两只试管各滴片一张5、用10×的低倍镜观察核型情况，选择核型好的试管进行滴片6、实验用具归位，工作区域消毒清洁外周血染色体G显带（考核）一．实验前准备1、0.035%浓度的胰酶50mL放置30-60分钟平衡至室温2、检查水浴箱的温度是否37℃3、50mLWashⅡ和胰酶放置37℃水浴箱预温4、50mL的PBS缓冲液加4管吉姆萨工作液二．

5、实验1、胰酶浸泡时间10-12秒（视情况）2、WashⅡ10秒3、吉姆萨工作液中2-3分钟4、蒸馏水冲洗5、吹风机吹干玻片6、镜下观察显带情况7、实验用具归位，工作区域消毒清洁。