资源描述：
《实时荧光定量pcr检测原发性肝癌中prl》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、实时荧光定量PCR检测原发性肝癌中PRL：程超，郭爱林，巫国勇，谢春玲，吴伟康【摘要】【目的】建立TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肝细胞再生磷酸酯酶2(PRL-2)mRNA表达水平，并应用该法检测原发性肝细胞癌中PRL-2基因的表达。【方法】构建含PRL-2基因开放阅读框架的T载体，制作标准曲线。提取手术切除12例人肝癌、门静脉癌栓（PVTT）和癌旁组织总RNA并逆转录为cDNA。应用实时荧光定量PCR法观察人肝细胞癌组织和门静脉癌栓及癌旁组织中PRL-2的表达水平。【结果】线性检测范围达
2、5个数量级,最低检测下限为1×102拷贝,最高检测上限为1×106拷贝。PRL-2在所有的门脉癌栓及10例肝癌组织表达，仅在4例癌旁组织中表达。门脉癌栓PRL-2mRNA表达水平显著高于肝癌及癌旁组织（P<0.01），肝癌组织表达显著高于癌旁组织（P<0.01）。【结论】实时荧光定量PCR可以准确定量测定PRL-2基因的表达；PRL-2基因在门脉癌栓的更高表达提示其在肝细胞癌的发生、转移中可能起重要作用。【关键词】肝细胞癌；聚合酶链反应;基因表达；PRL-2基因Abstract：【Objective】Toqu
3、antitativelydetectthemRNAexpressionlevelofPRL-2inprimaryhepatocellularcarcinomaethod.【Methods】TvectorincludingopenreadingframeofPRL-2geneakestandardcurve.ThetotalRNAisolatedfromhumanHCC,portalveintumorthrombosis(PVTT)andadjacentlivertissueethodethodedsuccessfully
4、topreciselydetectRNAlevelrangingfrom1×102copiesto1×106copies.PRL-2orthrombosis(PVTT)and10casesHCC,butonlyby4casesparatumortissue.TheexpressionlevelofPRL-2geneorlivertissuesandinHCC(P<0.01),anditorlivertissues.【Conclusion】TheRT-PCRistheprecisemethodtoquantitati
5、velydetectPRL-2geneRNAlevel.ThehigherexpressionofPRL-2geneinPVTTsuggestingthatitmayplayanimportantroleinthedevelopmentandmetastasisoftheHCC.Keya;polymerasechainreaction;geneexpression;PRL-2Gene[JSUNYat-senUniv(MedSci),2007,28（６）:702-705]肝细胞再生磷酸酯酶(phosphataseofreg
6、eneratingliver,PRL)是一类新发现的小分子酪氨酸蛋白磷酸酯酶，由PRL-1、PRL-2和PRL-3三个成员组成[1]。它们具有酪氨酸蛋白磷酸酯酶共同活化序列HCXXGXXR，分子量约为20ku，氨基酸同源性超过76％[2,3]。最近的研究表明，PRL-1、PRL-3与肿瘤的转移密切相关，特别是PRL-3与结肠癌、胃癌和黑色素瘤的远处转移存在密切相关性[4-8]。而PRL-2与肿瘤发生和转移的关系尚少见文献报道，为此我们建立了实时荧光定量PCR（real-timequantitativePCR,QT-PCR
7、）检测PRL-2基因的方法，并对PRL-2mRNA在肝癌中的表达进行了研究。1 材料与方法1.1肝癌组织12例新鲜肝癌、门静脉癌栓和癌旁肝脏组织来自2001年-2003年中山大学附属第一医院手术标本,手术切除组织立即液氮冻存。肿瘤组织均经病理检查证实,为肝细胞癌，根据TNM分期[9]均为Ⅳa期。1.2试剂TrizolReagent、SuperScriptⅡ逆转录试剂盒、DNaseⅠ购自美国Invitrogen公司,PCR试剂购自上海申能博彩生物公司,引物及荧光探针由上海博亚公司合成。ABI7000荧光定量PCR仪为美国A
8、BI公司产品。1.3总RNA抽提及反转录取冻存组织100mg,加入TrizolReagent1mL，匀浆后加入0.2mL氯仿,离心后吸取上清,加入0.5mL异丙醇,离心沉淀后弃上清,70%乙醇洗沉淀，DNaseI酶解可能残余的基因组DNA，RNA溶于DEPC水,甲醛变性凝胶电泳和以260nm及280nm吸光度值计算所
