固金消瘤胶囊对荷瘤小鼠化疗的增效减毒实验研究

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1、陕西中医学院2010届硕士学位论文实验研究1实验材料1.1受试样品固金消瘤胶囊，棕黄色粉末，0.40g/粒。（陕西省中医药研究所试剂中心提供）。1.2实验动物C57BL/6近交系小鼠，6-8周岭。购自第四军医大学实验动物中心，动物准用证书号：SCXK（军）2002-0051.3瘤株小鼠lewis肺癌细胞株，由上海市肿瘤研究所姚明研究员惠赠。1.4实验试剂VEGF免疫组化试剂盒北京中山生物有限公司提供，编号SC507注射用环磷酰胺江苏恒瑞医药股份有限公司提供，批号H32020852%醋酸溶液陕西省

2、中医药研究所试剂中心提供95%酒精陕西省中医药研究所试剂中心提供生理盐水陕西省中医医院西药房提供1.5实验仪器组织匀浆器陕西省中医药研究所提供电子显微镜陕西省中医药研究所提供血细胞计数仪陕西省中医药研究所提供；电子天平陕西省中医药研究所提供杭州电子仪器厂生产冰箱陕西省中医药研究所提供青岛海尔电器有限公司离心机陕西省中医药研究所提供上海安亭科学仪器厂微量移液器陕西省中医药研究所提供上海仪器厂恒温水浴箱陕西省中医药研究所提供常州国华电器有限公司2增效实验2.1实验动物C57BL/6近交系小鼠，60只

3、,雄性，体重20.0±2.0g2.2Lewis肺癌瘤细胞混悬液的制取4固金消瘤胶囊对荷瘤小鼠化疗的增效减毒实验研究将lewis肺癌荷瘤小鼠进行脱颈处死，然后放入95％酒精中浸泡10min，将消毒后的瘤鼠带入无菌操作室，在无菌台上分离瘤体，将生长良好无坏死的瘤体取下备用，取无菌小烧杯，将300目的尼龙网至于其口处，把瘤体置于尼龙网上剪碎，用弯剪研磨，用生理盐水反复冲洗，使细胞透过尼龙网滴入烧杯内。将收集的混悬液放入离心机设置1000转/min，离心10分钟。然后用生理盐水稀释细胞浓度至1×107/

4、ml，用0.2%台盼蓝染色，在倒置显微镜下计算活细胞数，即未染色的细胞数>95％[9~11]。1.3实验方法1.3.1分组、接种与给药将60只小鼠，随机分成6组，分别为对模型组，小剂量环磷酰胺组、大剂量固金消瘤胶囊组，大、中、小剂量固金消瘤胶囊加小剂量环磷酰胺组。于小鼠右前肢腋下接种lewis带瘤小鼠的瘤细胞，皮下注射瘤细胞混悬液0.2ml/只（107瘤细胞/只）。接种同日模型组及小剂量环磷酰胺组温水灌胃，其余组别用固金消瘤胶囊水溶液按大中小计量灌胃。7天后除模型组外其他个实验组开始合并腹腔注射

5、小剂量环磷酰胺，隔日一次，共五次1.3.2取材停药次日，处死小鼠，称重，解剖取瘤体，脾脏等称重，用10%甲醛固定部分肿瘤组织，石蜡包埋做冰冻病理切片，用于免疫组化检测VEGF表达情况。1.4观察指标1.4.1肿瘤细胞浆内VGEF含量的测定参考Kraan[12].方法对染色免疫组化切片的细胞浆表达的VEGF进行定量分析。采用LeicaQWinStandardV218自动图象分析系统,以VEGF阳性表达的平均积分光密度作为统计指标[13]。积分光密度=平均光密度×阳性面积。获得VEGF阳性表达的平均

6、积分光密。2.4.2抑瘤率的测定抑瘤率%=(C-T)/C×100%T---为实验组的平均瘤重；C---为模型对照组的平均瘤重。2.5统计学处理各组数据用均数±标准差（X±S）表示，采用SPSS13.0然间进行多个样本均数间两两比较的q检验。P＜0.05为有差异。P＜0.01为有显著差异。5陕西中医学院2010届硕士学位论文1.6实验结果与分析1.6.1各组间小鼠肿瘤组织细胞浆内VEGF阳性表达的平均积分光密q检验见表1表1各组小鼠肿瘤组织VEGF表达的平均积分光密度（X±S）组别剂量数量平均积分

7、光密度模型组常水20ml/kg1096991187±15851124环磷酰胺组20mg/kg1037087140±16981106固金消瘤胶囊组2.4g/kg1078695412±14592378固金（大）+环磷2.4g/kg+20mg/kg1033596832±14635981**固金（中）+环磷1.2g/kg+20mg/kg1029865248±15364895**固金（小）+环磷0.6g/kg+20mg/kg1036725864±11740146*与环磷酰胺组比较,*P<0.05;与环磷酰

8、胺组比较,**P<0.01如表1所示大中剂量固金消瘤胶囊加环磷酰胺组与环磷酰胺组比较有显著差异P<0.01。小剂量固金消瘤胶囊加环磷酰胺组与环磷酰胺组比较有差异P<0.05。说明固金消瘤胶囊能够增强环磷酰胺的抑制VGEF的作用。1.6.2各组间抑瘤率q检验见表2表2固金消瘤胶囊对lewis肺癌小鼠瘤体的影响组别瘤重抑瘤率瘤模3.35±0.371固金3.36±0.310-环磷酰胺2.46±0.38936.11%环磷+大2.33±0.400**44.06%环磷+中2.12±0.185**58.15%