中国特有植物羊踯躅遗传多样性issr分析

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1、摘要从5个天然居群(金溪、庐山、井冈山、武宁和瑞昌)采集羊踯躅样品，用改良的2×CTAB法从样品叶片中提取基因组DNA，优化了PCR循环参数，建立了ISSR—PCR扩增的最佳反应体系，从167条随机引物中筛选出多态性好且清晰度高的引物，并用筛选出的引物对39个羊踯躅个体的基因组DNA进行扩增，对羊踯躅居群的遗传多样性和遗传结构进行了研究。实验结果表明用丙酮对样品进行预处理可以提高产物的纯度。ISSR—PCR扩增条件经过优化后确定为在25ul的ISSRPCR反应体系中，各项因子最适条件为：模板DNA30～45ng／25ul，Mg”2．0--2．5mmol／]，dNTPsO．1～O．15mm

2、ol／1，引物0．3～O．41-tmol／1，Taq酶O．5～1．OU：10×PCRbuffer2．5ul，加ddHz0至25ul。其热循环参数为：94℃预变性5min，之后进行30个循环(94℃imin，55℃30s，72。C2mir1)，最后72℃延伸7min后在4℃终止反应。本研究对167条ISSR引物进行了筛选，筛选出多态性好且清晰度高的13条引物用于5个居群39个样本的扩增。结果共检测到196个位点，其中190个为多态性位点，多态性位点百分率(PPB)为96．94％。根据不同个体的扩增图谱构建了0、1矩阵输入计算机。数据处理结果如下：POPGENE分析表明羊踯躅具有丰富的遗传多

3、样性(H-O．3342，I=O．5007)。Nei’s遗传多样性和AMOVA分析表明，居群间存在有一定的遗传分化(6st分别为0．5084和0．5320)。由UPGMtA聚类分析可知金溪、庐山、井冈山和武宁四个居群聚为一一支，瑞昌居群单独作为一支。由Mante]相关性检测可知，居群的遗传距离与地理距离有一定的相关性，但并不显著。通过对羊踯躅遗传多样性和遗传结构的研究，提出了保护羊踯躅遗传多样性的策略：1．实施就地保护和迁地保护策略；2．建议在居群间进行植株和幼苗移栽，以提高居群间的基因交流，以最大限度保护羊踯躅自寸遗传多样性；3．保护和重建羊踯躅居群的适宜环境。关键词：羊踯躅；ISSR分

4、子标记；遗传多样性；遗传结构；保护策略AbstractTheimproved2xCTABmethodwasusedtoextractDNAfromRhododendronmolleG．Donplant-leaveswhichwel-egatheredfromJinxi、LushanMountain、JinggangshanMountain、WuningandRichang．TherecyclingparameterswereoptimizedandoptimalreactionsystemsuitableforISSR-PCRamplificationwasestablishedinth

5、epaper．Theprimersthatcarlproducepolymorphic，clearandbrJi曲tbandshavebeen∞lectedforISSRamplificationanalysisOil39samplesinRhododendronmolleG．Donspeciesfrom167randomprimers．Theresultsshowthatacetonecanimprovethepurityofoutput．TheoptirealreactionsystemofISSR-PCRforRhododendronmolleG．DonWaSdetermineda

6、sfollows：templateDNA30～45ng，Mg“2．0～2．5mmol／l，dNTPs0．I～O．15mmol／l，primer0．3～0．4pmoVl，TaqDNApolymeraseO．5～1．0U；10xPCRbuffer2．5ItlandddH20intotal251slreactionsystem，TheopticalamplificationprogramWasobtained：94℃5min，1cycle；94"Clmin，55℃30s，72℃2min,30cycle；72"CImin,Icycle；4*Cstop．13primersthatcallprodu

7、cepolymorpMc，clearandbrightbandshavebeenselectedforISSRamplificationanalysis011DNAsamplesin5RhododendromnolleG．Donpopulationsfrom167randomprimers．Using13primers，thetotal196lociwerefound，190ofwhichwerepolymorpb_icloci．T