胆汁淤积性肝病婴儿肠道微生态学研究

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1、授予单位代码10089学号或申请号20153321中国图书分类号R725.7HebeiMedicalUniversity硕士学位论文专业学位胆汁淤积性肝病婴儿肠道微生态学研究研究生：王培培导师：张琳教授专业：儿科学二级学院：第三医院2018年3月目录中文摘要.……………………………………………………………………1英文摘要…………………………………………………………………….4英文缩写…………………………………………………………………8研究论文胆汁淤积性肝病婴儿肠道微生态学研究前言……………………………………………………………………9材料与方法…………………………………………

2、………………10结果…………………………………………………………………….17附图…………………………………………………………………….19附表…………………………………………………………………….29讨论…………………………………………………………………….31结论…………………………………………………………………….34参考文献……………………………………………………………….35综述肠道菌群与儿童非酒精性脂肪性肝病………………………………37致谢…………………………………………………………………………..44个人简历……………………………………………………………………

3、..45中文摘要胆汁淤积性肝病婴儿肠道微生态学研究摘要目的：通过16SrDNA扩增子测序（16SrDNAAmpliconSequencing）技术及生物信息学分析，研究胆汁淤积性肝病婴儿肠道微生态学变化。方法：选择2016年12月至2018年1月在河北医科大学第三医院儿科、河北省儿童医院消化科及河北医科大学第二医院儿科住院的符合婴儿胆汁淤积性肝病诊断标准的患儿43例为病例组，选择同期在河北医科大学第三医院儿科门诊做健康体检婴儿37例为对照组。两组婴儿均来自石家庄本市及周边县区，其饮食习惯、生活方式、气候环境均相当。所选婴儿在采集标本前均征得其家长的知情同意，签知情同意书，并

4、获得河北医科大学第三医院医学伦理委员会审核通过。采用16SrDNA扩增子测序技术对两组婴儿的粪便标本进行测序及生物信息学分析。结果：1.数据信息：将收集的粪便标本病例组43例（ICH1-43），对照组37例（CK1-37），共80例进行测序，共获得7056085个RawTags，在经过数据质控后得到6738507个EffectiveTags。总碱基数1702232693bp，平均252.83bp，聚类后得到OTUs总数为22.320，平均每个样本OTUs数为279。（Fig.3)2.物种注释：物种构成及丰度在门水平上共检测到30个菌门,所测到的菌门中99.69%以上是以下4

5、个菌门：厚壁菌门（Firmicutes）、放线菌门（Actinobacteria）、变形菌门（Proteobacteria）、拟杆菌门（Bacteroidetes）。其中厚壁菌门在病例组与对照组丰度值分别达0.4179和0.4285，放线菌门在病例组和对照组丰度分别为0.2214和0.2846，变形菌门在病例组和对照组丰度分别为0.2531和0.1372，拟杆菌门在病例组和对照组丰度分别为0.1045和0.1476。两组婴儿粪便均以厚壁菌门丰度为最高，其中病例组患儿粪便中厚壁菌门、放线菌门及拟杆菌门较对照组丰度低。在属水平上共测得349个属，top10的菌属为双歧杆菌1中文

6、摘要（Bifidobacterium）、大肠杆菌（Escherichia-Shigella）、肠球菌（Enterococcus）、拟杆菌（Bacteroides）、链球菌（Streptococcus）、葡萄球菌属（Staphylococcus）、韦荣球菌属（Veillonella）、乳酸杆菌属（Lactobacillus）、布劳特氏菌（Blautia）及柔嫩梭菌（Faecalibacterium）。两组婴儿粪便中均以双歧杆菌丰度增高，与对照组比较，病例组患儿粪便的双歧杆菌、拟杆菌、布劳特氏菌、韦荣球菌及柔嫩梭菌属等5个菌属丰度低，而大肠杆菌、肠球菌、链球菌、葡萄球菌及乳酸杆

7、菌属等5个菌属丰度高。3.稀释曲线：在所测得80例样本中，当抽取测序量越来越大时，曲线趋向平坦，表明本研究所获得的样本合理，测序深度足够，可以进行下一步分析。4.物种累积箱形图：在所测得80例样本中，随着样本量的增加，有大量物种被发现，曲线表现为急剧上升趋势；当继续加大样本量，曲线渐渐趋于平缓，表示样本中的物种并不会随样本量的增加而显著增多，表明本研究样本量充足，可以满足抽样需要。5.NMDS分析法：病例组和对照组样本在二维平面上各自形成聚集区域，表明各组内样本包含的物种构成相似度较高，且两组间包含的物种构成相似性