肠道病毒71基因多态性变异与小儿中枢神经系统感染的关系

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1、肠道病毒71基因多态性变异与小儿中枢神经系统感染的关1胶州市人民医院儿内科266300;2胶州市人民医院266300;3青岛人学医学院附属医院儿内科266003摘要：A的：研宂IL-17F基因多态性变异，HLA-A27表型与肠道病毒71型(EV71)感染遗传易感性的关系，探讨不同的基因表型变异对EV71感染患病率风险的影响。方法：收集2011年11月-2013年11月EV71检测为阳性的急性期屮枢神经系统感染患儿123例，根据病情轻重分成轻症组、重症组；提取患儿外周血白细胞的基因组DNA，用序列特意性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)技术检测EV71感染患儿及正常对照儿童HL

2、A-A27表型的多态性和限制性片段长度多态性一聚合酶链反应(PCR—RFLP)检测IL-17F7488T/C位点的多态性。结果EV71感染患儿中HLA—A27表型阳性率(24.39%)与健康儿童组阳性率(11.82%)的差异有统计学意义(X2=6,099,P<0,05)。EV71屮枢感染患儿位点IL-17F7488T/C等位基因频率明显高于正常对照组(x2=6.367,P<0.05),感染组IL-17F7488TT基因型分布频率显著低于正常对照儿童(X2=5.393,P<0.05)；而轻症组与重症组相比，其差异无统计学意义(P>；0.05)。HLA—A27

3、(+)患儿屮，EV71感染组IL-17F7488T/C棊因型频率明显高于正常对照组(X2=3.866,P<0.05),而在HLA.A27(—)儿童屮，其差异无统计学意义。结论HLA-A27表型、IL-17F7488T/C位点基因多态性与EV71屮枢感染有关。关键词：肠道病毒71;HLA抗原；IL-17F多态性肠道病毒71型是儿童手足口病、屮枢神经系统、循环系统感染的主要病原菌。与肠道病毒家族的其他成员相比，EV71有较强的嗜血、嗜祌经性，更易引起屮枢神经系统损伤，严重患儿可出现肺水肿、心包积液而导致死亡。研究发现HLA—A27基因的表型与EV71感染有非常重要的相关性。I

4、L-17F能够促进其他炎症因子及趋化因子(IL-6,CXCL10)的释放，使炎症反应进一步扩大，IL-17F7488T/C（rs763780）位点具有基因多态性，且与多种疾病具有相关性，但对于IL-17F7488T/C位点基因多态性与EV71感染相关性研宄也有报道。IL-17F参与免疫应答过程白细胞和中粒细胞的生成及转移过程IL-17可引起CRP升高，IL-17F与IL-17具50%同源性，且多于二聚体的形式参与炎症反应，故推测IL-17F也可导致CRP升高。IL-17F7488T/C位点T→C的基因变异降低了EV71脑炎的患病风险，C等位基因是保护基因，而TT基因型

5、、T等位基因是EV71脑炎的遗传•易感因素。对象与方法一、研究对象收集2011年11月-2013年11月，在青岛大学医学院附属医院、青岛市儿童医院、胶州市人民医院和滨州市人民医院住院的中枢神经系统感染的患儿123例，平均年龄1.3-6.7岁，其中无菌性脑膜炎83例，脑炎40例，均符合《实用儿科学》的诊断标准，且经RT—PCR定性法检测粪便及脑脊液EV71病毒核酸均为阳性。根据病情轻重分成轻症组、重症组，重症组符合下列条件2项或以上：（1）频繁抽搐或惊厥持续状态；（2）意识障碍，Glasgow&迷评分<7分；（3）瘫痪；（4）出现脑干症状；（5）脑cT或MRI显示脑实质和（

6、或）脑干内异常密度灶。入院吋采集病儿静脉EDTA抗凝血2ml,于一20°C短暂保存备用，所有标本采集吋间均在病程前3d内。正常对照组110例，为同吋期健康体检儿童，临床无感染症状，年龄2.6—7.5岁，血常规及生化指标检查均在正常参考范围内。二方法1、标本基因组DNA的制备；采用天根公司全血DNA提取试剂盒，按试剂盒造作说明自抗凝全血中提取人基因组DNA.2、HLA-A27表型基因检测；参照Bunce等的报道设计扩增HLA-A27特异性引物。由上海生工生物技术有限公司合成。PCR扩增使用宝生物公司的PremixExTaq,参照试剂盒说明操作。HLA-A27表型扩增条件；950C

7、预变性3min,950C30S,610C30S,720C20S,35个循环;最后720C10min。扩增产物立即在琼脂糖凝胶上电泳检测。3、IL-17F引物设计EV71特异弓I物5′-ATGCGTAGAAAGGTGGAGCT-3′(341bp)5′-CGCATGTCGGTGAATAGCTC-3′4.组合基因型分型：HLA-A27(+)患儿中EV71感染组TNFRII+196TG基因型频率显著高于正常对照组,经统计学分析,差异有统计学意义(x2=