高效毛细管电泳临床应用

《高效毛细管电泳临床应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、高效毛细管电泳的临床应用高效毛细管电泳的临床应用文章来自http://www.bfblw.com/瑞典Uppsala大学物理化学系Svedberg教授提出,荷电的胶体颗粒在电场中移动的现象为电泳。高效毛细管电泳(HPCE)是在传统电泳基础上,继现代高效液相色谱技术之后发展起来的1种新型高效分离技术,它综合了经典电泳技术和现代微柱分离技术的优点,因而具有高效、快速、简便和自动化程度高的特点[1..2]。由于它突出的高效性和快速性,受到越来越多青睐,被广泛应用于生物化学、分析生物学和微生物学等领域[3..5]。1..HPCE原理当固体与液体接触时,固体表面由于某种

2、原因带1种电荷,另因静电引力使其周围液体带有相反电荷,在液..固界面形成双电层。当液体两端施加电压时,就会发生液体相对于固体表面移动,这种液体相对于固体表面移动的现象叫电渗现象。在石英毛细管柱中,当内充液pH>3时,表面电离成..SiO-,管内壁带负电荷,形成双电层。在高电场的作用下,带正电荷的溶液表面及扩散层向阴极移动,由于这些阳离子实际上是溶剂化的,故将引起柱中的溶液整体向负极移动。根据被分离物之间电荷和体积的不同,各种分子在高电压下被分离。在自由区带毛细管电泳中,电泳的移动(带电荷分子朝相反极性的电极方向移动)和电渗流导致了分离。2..毛细管电泳仪的基本

3、结构2.1..毛细管柱要求具有化学和电学惰性,可透过紫外光和可见光,柔韧性好,强度大,主要有熔融石英和聚四氧乙烯等材质,以前者为首选。2.2..进样系统为微量,采用自动进样,可以分两种:流体力学进样法,增加进样端气压;在出口端抽真空;利用虹吸原理,进样端高于出口端。电动进样法,用样品置换缓冲液并加电压来进样。2.3..高电压加在毛细管两端,产生100~500V/cm的电场强度,提高电压可缩短分离时间并使峰形变窄。但高压放热使蛋白质凝固,故必备良好的降温控制系统。2.4..检测器一般可选用紫外光或可见光检测器/传感器,使其在相应的领域内得以应用。3..毛细管电泳

4、的种类毛细管电泳目前有多种分离方法。可以分为:毛细管区带电泳、毛细管凝胶电泳、毛细管等电聚焦、毛细管等速电泳、胶束电动色谱、毛细管电色谱、亲和毛细管电泳等。有些毛细管电泳还可与其他分析方法联合运用,如:液相色谱..毛细管电泳、毛细管电泳..质谱等。HPCE按用途可分为临床检测和科研,被分析的物质有离子、小分子药物、蛋白、脱氧核糖核酸、手性对映体等。而毛细管区带电泳是目前应用最广的1种分离模式,适用于蛋白质、氨基酸、多肽类和离子的分析。4..毛细管区带电泳的临床应用4.1..血清蛋白质分析..将毛细管区带电泳用于血清蛋白分离的潜在临床诊断应用已在20世纪90年代

5、中期建立起来[6]。新鲜血清经电泳后可精确地描绘出患者蛋白质的全貌,常见的是清蛋白降低,某个球蛋白区域升高,提示不同的临床意义。当急性炎性反应时,可见..1、..2区百分率升高;肾病综合征、慢性肾小球肾炎时呈清蛋白下降,..2球蛋白升高,..球蛋白也升高;缺铁性贫血时可由于转铁蛋白的升高而呈现..区带增高;而慢性肝病或肝硬变呈现清蛋白显著降低,Gamma球蛋白升高2~3倍,提示免疫球蛋白多克隆增高,甚至可见....Gam..ma区带融合的桥连现象;另外,在Gamma区也可呈现细而密的寡克隆区带。对于单一克隆浆细胞异常增殖所产生的无抗体活性均一的免疫球蛋白M蛋白

6、的检测,血清蛋白电泳是其首选的实验诊断方法[7]。另有报道发现,当琼脂糖电泳与毛细管区带电泳比较时,毛细管区带电泳在清蛋白部分的分辨率增加,导致对双清蛋白血症检测的灵敏度改进。Jaeggi..Groisman等[8]在1年多的时间中分析6500例样品,发现8例双清蛋白血症,患者既没服用抗菌剂又无任何胰腺疾病。由经典的琼脂糖进行的手工分析工作中,在4年内仅仅发现1例。在定量结果方面,相对于琼脂糖电泳,毛细管电泳得出关于..1..酸性糖球蛋白的结果平均高于琼脂糖电泳结果,这与..1..酸性糖蛋白的唾液酸基团有关,它在基于凝胶的电泳中影响蛋国际检验医学杂志2011年

7、7月第32卷第10期..IntJLabMed,July2011,Vol.32,No.10..1083..白与染料的结合能力。在毛细管中应用的直接吸光度检测蛋白则不受这些糖基链的影响[9]。4.2..免疫分型鉴别单克隆蛋白的特征..用特异性的抗同型免疫球蛋白(anti..IgG、anti..IgA、anti..IgM、anti..Kappa、anti..Lambda)抗体,同一血清样本与各抗同型免疫球蛋白经毛细管电泳仪自动稀释混合后,分别进行毛细管电泳检测。通过用特异性抗体消除1个异常的蛋白峰来指示血清样本的某种单克隆成分。最终,对免疫球蛋白的型、亚型和轻链型予

8、以鉴定和分类。Lissoir等[10]