谈半夏泻心汤抗大鼠应激性胃黏膜损伤及对炎性相关因子含量的影响

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1、谈半夏泻心汤抗大鼠应激性胃黏膜损伤及对炎性相关因子含量的影响随着现代生活应激源的增加和持续存在，应激性胃黏膜病变的发生日益增多。应激性胃黏膜病变是机体在遭受应激状态时，发生的一种以炎性糜烂、浅表性溃疡及胃肠道出血为特征的急性胃黏膜损伤病变。胃是对应激反应最为敏感的器官之一，所以在身体和心理应激状态下很容易导致胃黏膜的急性损伤。中医认为心理应激属于中医的情志致病范畴，引发脏腑气机失调是其致病的重要特点，在应激性胃黏膜损伤病变中病位在脾胃，脾胃气机失调是其病机，所以防治的关键是调理中焦脾胃气机，使气机升降之枢纽协调通畅，中医以辛开苦降法作为调理气机重要治法，而斡旋脾

2、胃气机的代表方就是半夏泻心汤，临床和研究均证实辛开苦降的代表方半夏泻心汤可有效地预防应激性溃疡的发生。胃黏膜的急性损伤主要是由于胃黏膜的保护因子和攻击因子失去平衡有关，其中炎性相关因子的含量改变在病变中发挥重要作用。　　1材料与方法　　1.1动物分组　　与处理健康Sprague-Dan;2)℃，相对湿度(65±5)%，饲养条件相同。适应性饲养1周后，中药组给予半夏泻心汤药液按照1mL/100g灌胃，1次/d，持续3d;西药组给予奥美拉唑1mL/100g灌胃;空白组和模型组以等量生理盐水灌胃处理。　　1.2实验药物　　半夏泻心汤所用中药(半夏、黄芩、

3、黄连、干姜、人参、炙甘草、大枣)均一次性购自湖南楚仁堂大药房，经湖南中医药大学中药教研室专家鉴定，为正品。药物剂量比例按《伤寒论》原著:半夏半升，黄芩、黄连、人参、炙甘草各3两，黄连1两，大枣12枚。根据文献换算为现代用量，半夏55.7g，黄芩46.875g，干姜46.875g，人参46.875g，炙甘草46.875g，黄连15.625g，大枣42g。依据人单位体质量生药量(60kg)换算得大鼠单位体质量(200g)生药量。药物水煎30min，2次，提取水煎液，合并，水浴加热蒸浓缩至所需量，贮于冰箱中备用。奥美拉唑，北京康蒂尼药业有限公司生产，规格:20mg/片

4、，批准文号:国药准字H20031216，购于湖南老百姓大药房。实验时依人用药量换算成大鼠用药量，根据灌胃量，以生理盐水稀释成所需浓度。　　1.3主要试剂和仪器　　IL-1β、IL-8、TNF-α、IL-10酶联免疫(ElISA)试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司);PB-530酶标仪(深圳汇松科技有限公司)TGL16M台式高速冷冻离心机;(长沙科威实业有限公司);ES-C600电子天平(长沙湘仪天平仪器厂);DK-8D型电热恒温水槽(上海精宏实验设备有限公司);DHG-9246A型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)。　　1.4造

5、模方法　　除空白组外，中药组、西药组、模型组大鼠采用n;1)℃的水箱中，水面平大鼠胸骨剑突水平，水浸10h后大鼠取出松绑。　　1.5胃黏膜损伤指数　　(UI)检测造模后，所有大鼠10%水合氯醛麻醉仰卧固定于鼠板上，剖腹腹腔静脉采血，取胃。沿胃大弯剖开，用生理盐水冲洗干净，再用毛笔轻轻刷去胃黏膜表面黏液，在滤纸上平展开，10倍放大镜下肉眼观察大鼠的胃黏膜损伤情况，按:斑点糜烂计≤1mm计1分;1mm<损伤长度≤2mm计2分;2mm<损伤长度≤3mm计3分;3mm<损伤长度≤4mm计4分;糜烂长度>4mm计5分;宽度&

6、ge;2mm者计分加倍，累计所得损伤指数。　　1.6ELISA法检测　　IL-1β、IL-8、IL-10、TNF-α含量所有动物于造模后，10%水合氯醛腹腔注射麻醉。剖腹后，用一次性负压采血针腹动脉采血5mL静置30min，-4℃低温3000r/min离心15min，取上清液置于-20℃保存，测血清中IL-1β、IL-8、IL-10的含量。所有动物摘下全胃，沿胃大弯剖开，用生理盐水冲洗，取一部分胃组织称重，按1.5mL/400mg比例加入生理盐水，用玻璃匀浆器研磨，制成胃黏膜组织匀浆，4℃3000r/min离心10min，取上清液

7、，-20℃低温保存，测胃黏膜中TNF-α含量。从冰箱取出试剂盒和样品在室温平衡20min;取出板条，设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;待测样本孔先加生物素10μL，再加待测样本50μL;随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min;弃去液体，在吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，在吸水纸上拍干，如此重复洗板5次(也可用全自动酶标洗板机洗板)。每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育1

8、5min。每孔加入终止液