唾液淀粉酶活力测定

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1、唾液淀粉酶活力的测定一、实验目的了解并掌握唾液淀粉酶活力的测定方法二、实验原理唾液淀粉酶能催化水解淀粉，生成分子较小的糊精和麦芽糖。本实验利用碘的呈色反应来测定唾液淀粉酶水解淀粉作用的速度，从而测定唾液淀粉酶活力的大小。三、实验仪器和试剂1.仪器（1）多孔白瓷板（2）50mL三角瓶（3）恒温水浴锅（4）烧杯（5）500mL容量瓶（6）100mL容量瓶（7）漏斗（8）吸管2.试剂（1）原碘液：称取碘11g、碘化钾22g，加少量蒸馏水完全溶解后，定容至500mL，于棕色瓶中保存。（2）稀碘液：吸取原碘液2mL，加碘化钾20g，

2、用蒸馏水溶解，定容至500mL，于棕色瓶保存。（3）标准“终点色”溶液①准确称取氯化钴40.2439g、重铬酸钾0.4878g，加蒸馏水溶解并定容至500mL。②准确称取铬黑T40mg，加蒸馏水溶解并定容至100mL。取①液80mL与②液10mL混合，即为终点色。冰箱保存。Page3of3（4）2％可溶性淀粉溶液：称取烘干可溶性淀粉2.00g，先以少许蒸馏水混匀，倾入80mL沸水中，继续煮沸至透明，冷却后用蒸馏水定容至100mL。（需新鲜配制）（5）稀释100倍的唾液用蒸馏水漱口，以清除食物残渣，然后让唾液流入量筒并稀释1

3、00倍，混合备用。（6）0.02mol/L、pH6.8磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液：称取磷酸氢二钠45.23g和柠檬酸8.07g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL，配好后用酸度计或精密试纸校正pH。四、操作步骤（1）将“标准色”溶液滴于白瓷板的左上角空穴内，作为比较终点色的标准。（2）在50mL的三角瓶中，加入2％可溶性淀粉溶液20mL，加缓冲液5mL在37℃水浴中平衡约10min，加入0.5mL稀释唾液，立即记录时间，充分摇匀。定时用滴管取出反应液约0.25mL，滴于预先充满此稀碘液（约0.75mL）的调色板空穴内，当空穴

4、颜色由紫色变为棕红色，与标准色相同时，即为反应终点，记录时间T（min）。五、计算1mL唾液淀粉酶于37℃、pH6.8的条件下，1h液化可溶性淀粉的克数，称为唾液淀粉酶的活力单位。酶活力单位=（60/T×20×2％×n）/0.5n——唾液淀粉酶稀释倍数Page3of360——1h（60min）0.5——吸取待测唾液淀粉酶的量（mL）2％——淀粉浓度20——2％可溶性淀粉溶液的量（mL）T——反应时间（min）六、注意事项1.全部时间应该控制在2～2.5min，否则应改变稀释倍数，重新测定。2.实验中，吸取2％可溶性淀粉及稀

5、释唾液淀粉酶的量必须准确，否则误差较大。Page3of3