谈冠心舒通对脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力及脑组织bcl

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1、谈冠心舒通对脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力及脑组织Bcl脑血管病是临床常见病、多发病，其发病率、病死率逐年升高，在这一疾病相应的治疗过程中发现脑缺血再灌注(Cerebralischemia-reperfusion，I/R)的病理生理过程起着重要的作用。近年来研究发现脑I/R损伤与细胞凋亡有着密切的关系，凋亡机制参与脑I/R损伤已成为临床研究的热点。以往研究表明，冠心舒通具有调整、改善心血管功能的作用，它能减轻心肌缺血程度及减小梗塞面积、能降低血浆纤维蛋白原含量、抑制血小板黏附性和聚集性、改善血液流变性、增加冠脉血

2、流量及改善心肌的供血供氧，对心肌缺血再灌注损伤有明确的保护作用，但对冠心舒通能否影响脑I/R损伤的研究甚少，本实验通过检测大鼠学习记忆能力及细胞凋亡的调控，旨在探究冠心舒通是否对脑I/R损伤具有保护作用。　　1材料与方法　　1.1实验试剂冠心舒通胶囊(咸阳步长制药有限公司生产，每粒装0.3g，国药准字Z20020055，产品批号100101);兔抗鼠Bcl-2和Bax抗体购于北京博奥森生物有限公司;SP和DAB试剂盒购于福州迈新生物有限公司;ELISA试剂盒购于南京建成生物有限公司。　　1.2模型的制作采用线栓

3、法，结扎大鼠左侧颈总动脉建立脑I/R模型。选长约5cm、直径0.24mm的美国进口尼龙实验栓线。用10%水合氯醛溶液腹腔注射麻醉，麻醉满意后四肢及头部固定，颈部正中做2cm竖切口，先分离左侧颈总动脉，再分离左颈内动脉及颈外动脉，避免刺激迷走神经，沿颈内动脉向上走行分离翼腭动脉，结扎根部。假手术组仅暴露颈总动脉其他不作处理。造模成功标准清醒后评定:(1)右侧前肢屈曲，不能完全伸展;(2)提尾时，右侧前肢抓力减弱;(3)提尾时向右侧转圈;(4)自由运动时，无方向性，向右侧转圈或倾倒;(5)不能自发行走，意识丧失。造

4、模成功后2h将栓线拔出形成再灌注模型。　　1.3动物分组及给药健康的orris水迷宫测试测试潜伏期、经过平台次数和平台象限停留时间，Morris水迷宫训练7d后，于第8天测试。　　1.5.2大鼠血清中Bcl-2和Bax蛋白水平的检测采用ELISA法检测，严格按试剂盒说明书操作。　　1.5.3大鼠脑组织的病理改变采用HE染色观察，常规石蜡包埋，切片5μm，光学显微镜下观察。　　1.5.4大鼠脑组织中Bcl-2和Bax蛋白水平的检测采用免疫组织化学-SP法检测，切片3μm，严格按试剂盒说明书进行。光学显

5、微镜下观察结果:细胞质阳性呈棕黄色，苏木精复染细胞核呈蓝色。　　1.5.5大鼠脑组织中Bcl-2和BaxmRNA水平的检测引物序列由上海生物工程公司合成。Bcl-2;上游引物5'-CACATCTGGAGACTATAAGA-3'，下游引物5'-CTCTAAGTTGCGTTATCTAC-3'，产物242bp;Bax:上游引物5'-GCTAATGGAGGAGAAGAAGT-3'，下游引物5'-CTGACCTGTTGGACCTTGTG-3'，产物298bp

6、;凝胶成像后用凝胶图像分析系统分析结果。　　1.6统计学处理　　采用SPSS13.0统计学分析软件，测试潜伏期、经过平台次数、平台象限停留时间、大鼠血清中Bcl-2及Bax的蛋白水平和脑组织中Bcl-2、Bax的蛋白及mRNA水平，其数据均以x±s表示，进行t检验。　　2结果　　2.1测试潜伏期、经过平台次数和平台象限停留时间的检测与脑I/R模型组比较，冠心舒通高剂量和低剂量组大鼠测试潜伏期均缩短、经过平台次数均增多、平台象限停留时间均增加，差异均有统计学意义(P<0.01)，且冠心舒通高剂

7、量组好于冠心舒通低剂量组，有显著差异(P<0.01);与假手术组比较，冠心舒通高剂量组大鼠测试潜伏期略延长、经过平台次数和平台象限停留时间略减少，但无显著差异(P>0.05)，冠心舒通低剂量组大鼠测试潜伏期延长、经过平台次数和平台象限停留时间减少，有显著差异(P<0.01)，脑I/R模型组大鼠测试潜伏期明显延长、经过平台次数和平台象限停留时间明显减少，有显著差异(P<0.01)。　　2.2脑组织的病理改变结果HE染色结果假手术组:脑组织细胞排列紧密整齐;模型组:脑组织细胞排列松散紊乱，细

8、胞核浓缩，细胞质淡染;高剂量组:脑组织细胞排列比较紧密整齐;低剂量组:脑组织细胞排列较为紧密整齐，可见细胞核浓缩，细胞质淡染。　　2.3大鼠血清中Bcl-2和Bax蛋白的水平与脑I/R模型组比较，冠心舒通高剂量和低剂量组血清中Bax蛋白含量降低、Bcl-2蛋白含量升高均有统计学意义(P<0.01)，且冠心舒通高剂量组好于冠心舒通低剂量组，有显著差异(P<0.01);与假手术