资源描述：
《人工灌胃方式给成蛙给药的尝试》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、人工灌胃方式给成蛙给药的尝试 蛙类可以控制昆虫的数量,同时也是许多食肉动物的食物,在食与被食的食物链中,蛙类在生态系统中扮演着重要的角色[1].近年来蛙类种群数量趋于下降[2-4],环境化学污染(如杀虫剂、重金属、氯化物)对蛙类的影响备受关注[5,6].蛙类作为环境监测指示生物被广泛应用在科学实验中[7]. 蛙的一生要经历受精卵、蝌蚪和成蛙3个阶段,受精卵和蝌蚪历时较短,成蛙是蛙类变态后的主要生命形态,担负着交配繁殖的重要任务.因此、研究环境污染物对成蛙的毒性影响尤为重要.但目前研究农药、重金属等环境污染物对蛙类的毒性及安全性评价主要集中在受精卵
2、、蝌蚪[8-10]和蛙类的一些离体组织上[11],或者对幼蛙进行野外实验时采用环境给药[12].由于蛙类的独特生物学特性---对活动的物体较敏感,其染毒方式的选择比较困难,因此,对于成蛙消化道染毒的研究报道较少. 在开展实验动物毒性实验时,实验动物的染毒方式一般选择经口染毒(通过胃肠道)、注射染毒和皮肤染毒等,由于不同的染毒方式可能导致动物的不同剂量效应反应[13],为了能够精确给药,我们拟以虎纹蛙成蛙为实验动物,采用人工灌胃方式进行给药,以探索一种新的成蛙给药方式,为以成蛙为受试动物进行药物毒性研究提供新的途径和方法. 1材料和方法 1.1成
3、蛙的保定 在抓握蛙的时候应佩戴表面光滑的乳胶手套.手掌抓住其背部,腹部朝下,放在湿纱布上,防止擦伤成蛙的皮肤,拇指和食指卡住其头部两侧,另一只手,遮住成蛙的眼睛,使其平静,待其安静后,实施灌胃. 1.2灌胃器的制作及饲喂方法 完整的灌胃器主要包括吸料注射针管和送料软管.为实用和制作方便,选取一支10mL或30mL的一次性注射器,去除针头,以针管为主要灌胃工具.在针管出口处加上直径匹配的软管,长度为10cm左右,用医用胶带固定.饲喂时,将已抽取饲料的针管由软管前端从成蛙的侧面嘴角处插进成蛙口中1cm左右,一般成蛙就会自己主动取食,将软管吞入胃中,
4、保持不动,当软管被成蛙吞入5-6cm时,将针管中的定量饲料推进去,再拔出软管.如果成蛙没有主动吞食软管,就将软管直接沿着食道插入胃中推注.灌胃动作如图1所示. 1.3灌饲毒物的准备和饲料的调制 实验采用的毒物为一种生物农药---苏云金芽孢杆菌(Bt)悬浮液(液体,8000IU/mg),购自扬州绿源生物化工有限公司.将市售膨化蛙料(购于南京嘉吉饲料有限公司)与水按1∶3比例浸泡后,用搅拌器将饲料搅拌成无颗粒的糊状,使能顺利通过注射器前端,然后按比例添加Bt菌剂,并搅拌均匀,使所添加受试物均匀分布在糊状饲料中. 1.4成蛙分组及饲养管理 虎纹
5、蛙(Ranarugulosa)成蛙购自养殖场,选取90日龄、体质量在140-220g同批次的健康成蛙.对实验蛙进行灌饲训练,以增加其适应性.实验室适应一周后,称体质量并分组.实验共分1个空白对照组(C0)和5个苏云金芽孢杆菌(Bt)剂量组,其剂量分别为1000,2150,4640,10000,21500mg/kg,其编号分别为T1、T2、T3、T4和T5,每组20只成蛙,每组4个重复,每个重复5只成蛙,每个重复饲养在1个直径为1m的水族箱中,每个水族箱底加2-3cm水,每天清洁水族箱1次,清除排泄物.第1天灌胃含有Bt菌剂的饲料,观察24h毒性反应,
6、之后,每天灌胃正常饲料,即未添加毒物的糊状饲料.每只成蛙每次灌胃前称体质量,并按照体质量的6%进行灌胃.持续灌胃14d,每天观察成蛙的行为并记录成蛙的存活情况,每7d称一次体质量并记录. 1.5数据处理 实验数据用ExcelSPSS13.0等软件进行统计分析,数据以平均值±标准差(x珋±s)表示.利用SPSS软件进行机率单位加权回归法(Bliss法)计算LD50.利用单因素方差分析(One-,MannRVH,CatherineBC,etal.Amphibiansandagriculturalchemicals:Revi
7、eent[J].EnvironmentalPollution,2009,157:2903-2927. [7]陶宏婷,吴端生.水生动物用于科学实验的最新进展[J].实验动物科学,2013,30(5):59-63. [8]DenoelM,D'HoogheB,FicetolaGF,etal.Usingsetsofbehavioralbiomarkerstoassessshort-termeffectsofpesticide:astudycaseoldiF,FogelMN,SchneiderMI,etal.Lethalandsublethalef
8、fectsofcypermethrinandmethoxyfenozideonthelarvaeofRach
