生防菌菌株ｌｄｂ１对植物病原真菌的抑菌谱

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1、生防菌菌株ＬＤＢ１对植物病原真菌的抑菌谱李铁军，丁邦琴，蔡凤，陈玉霜（南通职业大学化学与生物工程学院，江苏南通２２６００７）摘要：以枯草芽孢杆菌（ＢａｃｉｌｌｕｓＳｕｂｔｉｌｉｓ）菌株ＬＤＢ１为试验材料，研究其固体、液体培养条件下的抑菌谱情况，明确该菌株对植物病原真菌［水稻纹枯病菌（Ｒｈｉｚｏｃｌｏｎｉａｓｏｌａｎｉ）、苹果轮纹病菌（Ｐｈｙｓａｌｏｓｐｏｒａｐｉｒｉｃｏｌａ）、腐霉病菌（Ｐｙｔｈｉｕｍ）、油菜菌核病菌（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）、小麦全蚀病菌（Ｇａｅｔａｎａｎｎｏｍｙｃｅｓｇｒａｍｉｎｉｓ）、棉花枯萎病菌（Ｆｕｓａ

2、ｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍｆ．ｓｐ．Ｖａｓｉｎｆｅｃｔｕｍ）、小麦根腐病菌（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍｓｏｒｏｋｉａｎｕｍ），番茄灰霉病菌（ＢｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａＰｅｒｓ）］的抑制效果。结果表明，两种培养条件下对供试的８种植物病原真菌均有较好的抑制效果；除水稻纹枯病菌和苹果轮纹病菌外，液体培养对其他５种病原菌的抑制作用优于固体培养，比较分析显示两种培养方式处理差异显著。..关键词：生防菌；枯草芽孢杆菌（ＢａｃｉｌｌｕｓＳｕｂｔｉｌｉｓ）菌株ＬＤＢ１；植物病原真菌；抑制作用中图分类号：Ｓ４７６．１文献标识码：Ａ：０４３９－８１１４（２０１５

3、）０２－０３４１－０５ＤＯＩ：１０．１４０８８／ｊ．ｃｎｋｉ．ｉｓｓｎ０４３９－８１１４．２０１５．０２．０２１化学杀菌剂暴露出的诸多难以克服的缺点使新型生防菌剂的研发成为农业有害生物防治热门。拮抗细菌在植物病害防治中起到了非常重要的作用，无论是在自然发生的生物拮抗现象还是在生物防治中，细菌的生防效果都非常明显［１］。在众多的生防细菌中，枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓsｕｂｔｉｌｉｓ）凭借其易培养、环境适应能力强、对人畜无毒等优点而为人青睐［２，３］。枯草芽孢杆菌用于防治的植物病害主要包括蔬菜病害［４］、作物病害［５］、林木果树病害［６］，在用于植物病

4、害的生物防治方面的研究和开发应用取得令人瞩目的成就，美国已有４株枯草芽孢杆菌生防菌株获得环保局（ＥＰＡ）商品化或有限商品化生产应用许可［７］；中国已开发出一批生防效果优良的枯草芽孢杆菌菌株［８］，如Ｂ９１６、Ｂ９０８、Ｂ３、Ｂ９０３、ＢＬ０３、ＸＭｌ６等。现有商品化的枯草芽孢杆菌制剂由于使用的枯草芽孢杆菌菌株不尽相同，防治对象也各不相同。本研究以枯草芽孢杆菌菌株ＬＤＢ１为试验材料，进行固体、液体培养条件下的抑菌谱比较，以明确该菌株对不同类型植物病原真菌的抑制效果，从而为生防菌菌株ＬＤＢ１制剂的研发、生产、田间应用提供理论依据。１材料与方法１．１材料１．

5、１．１供试菌株生防菌菌株ＬＤＢ１，由南通职业大学化学与生物工程学院实验室分离筛选得到，水稻纹枯病菌（Ｒｈｉｚｏｃｌｏｎｉａｓｏｌａｎｉ）、苹果轮纹病菌（Ｐｈｙｓａｌｏｓｐｏｒａｐｉｒｉｃｏｌａ）、腐霉病菌（Ｐｙｔｈｉｕｍ）、油菜菌核病菌（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）、小麦全蚀病菌（Ｇａｅｔａｎａｎｎｏｍｙｃｅｓｇｒａｍｉｎｉｓ）、棉花枯萎病菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍｆ．ｓｐ．Ｖａｓｉｎｆｅｃｔｕｍ）、小麦根腐病菌（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍｓｏｒｏｋｉａｎｕｍ）、番茄灰霉病菌（ＢｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａＰｅｒｓ

6、）由南通职业大学化学与生物工程学院实验室提供。１．１．２培养基ＹＰＧＡ培养基（固体）：胰蛋白胨５ｇ，酵母膏５ｇ，葡萄糖２０ｇ，琼脂１５ｇ，蒸馏水１０００ｍＬ。用于生防菌菌株ＬＤＢ１的活化及固体培养。ＹＰＧＡ培养基（液体）：胰蛋白胨５ｇ，酵母膏５ｇ，葡萄糖２０ｇ，蒸馏水１０００ｍＬ。用于生防菌菌株ＬＤＢ１的液体发酵培养。ＰＤＡ培养基：马铃薯２００ｇ、琼脂１５ｇ、蔗糖２０ｇ、蒸馏水１０００ｍＬ。用于植物病原真菌的活化及培养。１．１．３仪器和设备分析天平，电磁炉，高压灭菌锅，超净工作台，恒温培养箱，恒温培养摇床，接种环（勾）、尺子、照相机、微波炉、报纸、纱布

7、、铁架台、导管、试管、镊子、玻璃器皿等。１．２方法１．２．１菌种活化细菌活化：在超净工作台中，用接种环在斜面上挑一环生防菌菌株ＬＤＢ１到新的ＹＰＧＡ固体斜面培养基上，“Ｚ”字形划线接种，在恒温培养箱中２６℃培养２ｄ。真菌活化：第一次活化。在超净工作台上，用接种针在斜面上挑一块真菌菌种接种到ＰＤＡ培养基的斜面上，在恒温培养箱中２６℃培养５～７ｄ。第二次活化。在超净工作台上，用接种针在第一次活化培养的ＰＤＡ培养基斜面上挑一块真菌菌丝接种到ＰＤＡ平板中央。接种后，将培养皿放入２６℃的培养箱中培养至能打出满足试验所需的菌饼。１．２．２生防菌菌株ＬＤＢ１固体培养

8、下的抑菌谱测定将ＰＤＡ培养基熔化后倒入培养皿冷凝后，采用平板对峙法［９］，在平板中央接种直径为