不同金属离子对酶活性影响

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1、金属离子对酶活性的影响实验目的：1、了解金属离子对酶活性的影响；2、掌握不同金属离子对酶活性作用结果的测量方法实验原理：酸性磷酸酯酶广泛分布于动物和植物中，植物的种子、霉菌、肝脏和人体的前列腺中。它对生物体核苷酸、磷蛋白和磷脂的代谢，骨的生成和磷酸的利用，都起着重要作用。磷酸酶是一种能够将对应底物去磷酸化的酶，通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去，并生成磷酸根离子和自由的羟基。磷酸酶的作用与激酶的作用正相反，激酶是磷酸化酶，可以利用能量分子，如ATP，将磷酸基团加到对应底物分子上。本实验选用绿豆芽作材料，从中提取酸性磷酸酯酶。以人工合成的对硝基

2、苯磷酸酯（NPP）作底物，水解产生对硝基苯酚和磷酸。在碱性溶液中，对硝基酚盐离子在405nm处光吸收强烈，而底物没有这种特性。凡是能提高酶活性的物质统称为酶的激活剂。无机离子和一些金属离子对酶有激活作用，可以作为酶的激活剂。其中钾离子是酸性磷酸酯酶的一种激活剂，它在酶与底物之间起了桥梁作用，形成了酶—金属离子—底物三元复合物，从而更有利于底物与酶的活性中心部位的结合。而氯离子和钠离子对酸性磷酸酯酶的活性没有什么影响.一些重金属离子如铜离子，对酶活性具有抑制作用。实验用品：1、仪器：恒温水浴箱、试管架、试管、分光光度计、比色皿、吸头、滴管、移液枪、移液

3、管2、试剂：1.2mmol/LNPP100ml、0.3mol/LNaOH250ml、酸性磷酸酯酶、pH5.0的柠檬酸缓冲液1000ml、2mmol/LFeSO4、2mmol/LCuSO4、MnCl22mmol/L、MgSO42mmol/L、KCl2mmol/LEDTA、实验步骤：调零FeSO4CuSO4MnCl2MgSO4EDTAKCl空白对照01234567NPP（ml）11111111酶液(ml)11111111金属离子（11111111ml）NaOH(ml)33333333注：反应均在37度水浴箱中进行，0号管先加入1.0mlNPP后保温15分

4、钟，然后加入NaOH3ml，混匀后再加酶液1ml，在波长405nm处观察OD值，以0号管调零实验结果调零FeSO4CuSO4MnCl2MgSO4EDTAKCl空白对照试管号01234567OD（abs）00.6840.3091.2620.3570.3410.3420.284由实验数据得到的图标如下：实验作业：以各金属离子为横坐标，A405纵坐标，绘制不同金属离子与酶活力曲线，观察金属离子与酶活力的关系，分析哪些是酶活性激活剂，哪些是酶活性抑制剂。结果分析：通过实验组与对照组的OD值对比可知，保证在适宜的温度、pH等外界条件下，再加入1ml2mmol/

5、L浓度的各种金属离子溶液，对酸性磷酸酯酶的活力均有激活作用。它们对酸性磷酸酯酶激活作用的强度由大到小依次为：MnCl2、FeSO4、MgSO4KCl、EDTA、CuSO4。可以看出，重金属对这种酶的激活作用比较强。