人脊索瘤细胞的体外侵袭性

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1、人脊索瘤细胞的体外侵袭性　　摘要:目的观察人脊索瘤细胞在体外侵袭性的大小，探讨与肿瘤侵袭性密切相关的尿激酶型纤溶酶原激活物（uroki-nase-typeplasminogenactivator，uPA）在侵袭中的作用.方法利用体外球体侵袭模型观察人脊索瘤细胞的侵袭特性和侵袭过程;应用免疫组化SABC法检测脊索瘤细胞中uPA的表达情况，并且观察用uPA抗体后肿瘤细胞侵袭性的变化.结果肿瘤细胞球体在接触预培养的鸡胚心肌块（precultureheartfragment，PHF）后3d即包绕PHF，并有部分侵袭，接触培养5d，每个PHF即有一半左右被侵

2、袭，10d左右，PHF即完全被侵袭.免疫组化染色，阳性细胞占63%，为uPA高表达.在培养液中加入uPA抗体后，肿瘤细胞侵袭性减低.结论人脊索瘤细胞具有一定的侵袭性;该细胞uPA高表达;uPA抗体可使脊索瘤细胞的侵袭性减低.　　Keya;invasion;urokinase-typeplasminogenactivator;immunohistochemistry　　Abstract:AIMToevaluatetheinvasionofhumanchordo-macellinvitro，andtheeffectsofurokinase-typepl

3、asmino-genactivatorontumourinvasion.METHODSTheinvasivecapacityandtheinvasiveprocessofchordomacellsodeloftumourcellspheroidaggregateinvitro;Applyingstreptavidin-biotinplex（SABC）immunohistochemicaltechnique，theexpressionofuPAinhumanchordomacelllineourcellspheroidaggre-gates，they

4、ostofPHFsanchordomacell，thepositiverateacellono-clonalantibodiesofuPAedium.CONCLUSIONHumanchordomacelllinehasahighcapaci-tyofinvasioninvitro，andhashighuPAexpression.Thean-tibodyofuPAmaydecreasetheinvasionofchordomacellline.　　0引言　　脊索瘤起源于胚胎残留的脊索组织，多发生于人体中轴骨，骶尾部较常见，组织学表现为低度恶性，发生转

5、移较晚［1］，但其局部表现为侵袭性生长，边界不清，手术复发率较高［2］.有关脊索瘤的侵袭性研究目前尚未见报道，我们利用本所建立的人脊索瘤细胞系（CM-319），采用体外球体侵袭模型观察了人脊索瘤细胞的侵袭特性和侵袭过程，用免疫组化SABC法检测脊索瘤细胞中uPA的表达情况，并观察了加入uPAmAb对脊索瘤细胞侵袭性的影响.　　1材料和方法　　1.1材料脊索瘤细胞系为本所建立，常规传代培养.鸡胚用受精鸡蛋于孵箱中孵育.免疫组化兔抗人uPAmAb为OncogenScienceInc.产品，一抗及SABC试剂盒（即用型）均购自武汉博士德生物工程公司.　　

6、1.2方法　　1.2.1球体侵袭试验参照高进［3］方法加以改进.①瘤细胞球体的制备:将长满瓶壁的脊索瘤细胞划割成1cm×1cm的方块，用不含EDTA的胰蛋白酶消化后，移入底部铺有琼脂的培养瓶中培养3d;②球体器官块的制备:取孵育9d的鸡蛋，无菌条件下取出鸡胚心脏，剪去大血管和心房，将心室肌剪成0.4mm×0.4mm×0.4mm的小块，置于底部铺有琼脂的培养瓶中常规培养3d;③侵袭复合体的制备:将制备好的瘤细胞球体与鸡胚心肌块（PHF）移入底部铺有琼脂的24孔板内，每孔一对，使其紧密接触，4h后加入培养液，继续培养.在培养后1，3，5，7，10和14

7、d分别取材制作组织切片.培养过程中用倒置显微镜观察侵袭过程.　　1.2.2免疫组化SABC染色于培养皿内放置数张盖玻片，将脊索瘤细胞悬液滴于其上培养，待细胞长满后进行染色.染色方法按说明书上步骤进行，以PBS代替一抗作为阴性对照.结果判定:阳性以瘤细胞胞质、胞膜出现棕黄色染色为准.随机在显微镜高倍视野下计数1000个瘤细胞，无阳性细胞或阳性细胞<5%为阴性;阳性细胞5%～50%为弱阳性;阳性细胞≥50%为强阳性.　　1.2.3uPA抗体抑制侵袭试验将1∶100的uPAmAb加入球体侵袭试验侵袭复合体的培养液中，每孔加入50μL，并设对照，培养

8、、取材方法与上述相同.　　图1－图5略　　　　2结果　　2.1侵袭试验结果侵袭试验共重复两次，结果相似.球体与PHF接触培