芪丹通脉片预防异丙肾上腺素所致的大鼠慢性心肌缺血

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1、芪丹通脉片预防异丙肾上腺素所致的大鼠慢性心肌缺血：李晶华，王宗仁，肖铁卉，邵中军，马静，郑谨，马爱玲，龙铟，王文，李军昌【关键词】芪丹通脉片　　【Abstract】AIM:ToinvestigatethepreventiveeffectsofQidantongmaitabletonchronicmyocardialinfarctioninmiceanditspossiblemechanism.METHODS:T)对大鼠慢性心肌缺血预防作用及其机制.方法：采用SD大鼠为研究对象，比较观察QDTMT长期小剂量给药对异丙肾上腺素所致的心肌缺血保护作用，

2、通过检测心肌血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）表达，探讨其可能作用机制.结果：未注射ISO组未见VEGF,bFGF表达，而在注射异丙肾上腺素(Iso)各组VEGF,bFGF表达均增加，给药组VEGF,bFGF表达量高于未给药组.结论：QDTMT能够预防慢性心肌缺血，促进VEGF,bFGF表达.　　【关键词】芪丹通脉片；慢性心肌缺血；血管内皮生长因子；碱性成纤维细胞生长因子　　0引言　　预防慢性心肌缺血的主要手段有长期服用小剂量阿斯匹林、硝苯地平的西药制剂.但中药在这方面的应用研究较少.芪丹通脉片(Qidaitongm

3、aitablet,QDTMT)是我们在传统医学理论与实践的基础上组建的中药方剂，动物实验和临床试验均证明对缺血性心脏病有显著疗效.本次研究的主要就其长期小剂量给药对慢性心肌缺血的预防作用及其机制进行探讨.　　1材料和方法　　1.1材料SD大鼠48只，雄性，体质量（170±20）g，第四军医大学实验动物中心提供.芪丹通脉片西京医院提供，主要成分为黄芪30g、当归15g、丹参30g、红花30g、桂枝10g.QDTMT1g干粉含2.86g生药；盐酸异丙肾上腺素注射液上海天丰药厂生产(批号900811).　　1.2方法先把动物分为2组：未处理组（不注射异

4、丙肾上腺素）和处理组（注射异丙肾上腺素）.处理组又分为空白对照组、QDTMT低剂量组和QDTMT高剂量组，每组12只，实验前测体质量、作心电图.空白对照组（生理盐水量为3mL・kg-1）；QDTMT低剂量组（1.0g・kg-1）；QDTMT高剂量组（2.0g・kg-1）.灌胃前用生理盐水配置成等体积药液并分别灌胃，每日2次，连续14d.处理组第14日注射异丙肾上腺素，每次4μg・kg-1，每日2次，造模2d后测心电图，断颈处死后取心肌.未处理组测心电图，断颈处死后取心肌.石蜡切片梯度脱蜡，4

5、.5mL・L-1的H2O2室温封闭15min；每张滴加10g・L-1胰蛋白酶50μL，37℃消化30min;20g・L-1正常羊血清28℃封闭20min.加PBS稀释的一抗50μL(bFGF1∶50,VEGF1∶100)，阴性对照片加入等量的PBS.湿盒孵育4℃过夜；滴加生物素标记的羊抗兔IgG50μL(PBS1∶200稀释)，28℃孵育30min；滴加ABC液8℃孵育30min；DAB显色液50μL，避光显色5~8min.各步骤之间洗3次，每次5min；自来水冲洗5min终止显色；脱水、透明、树脂封片.

6、bFGF，VEGF为细胞质棕黄色染色.显微镜观察下根据免疫组化染色深度、范围对染色结果综合判断.　　将SD大鼠用200g・L-1乌拉坦麻醉后，四肢固定，用Cardiofax心电图仪描记心电图，同步记录Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ导联及心前区搏动最明显处心电图，测量比较各组ECG之J点上升，ST段下移，T波上升的变化.出现下列一项者为阳性心肌缺血：J点上升>15mV，T波低平(下降>50%)倒置，ST段下移>0.5mV，心律不齐.走纸速度25mm・s-1，灵敏度为1mV.　　2结果　　2.1心电图未处理组心电图无缺血改变

7、.处理组各组ST段均抬高，提示本次造模成功.用药组的心电图改变要低于模型组，提示QDTMT可以对抗异丙肾上腺素造成心肌缺血，具有保护作用.　　2.2VEGF,bFGF表达未处理组两种因子均无表达.在处理组各组中，VEGF,bFGF均有表达.VEGF在QDTMT高剂量组表达颜色最深，低剂量组次之，损伤组表达最少（Fig1）.提示QDTMT可以促进缺血心肌表达VEGF.bFGF在3组中表达的量较恒定（Fig2）.　　图1不同条件下慢性心肌缺血VEGF的表达（略）　　Fig1ExpressionofVEGFinchronicmyocardialinfa

8、rction×400（略）　　A:Model;B:Mindose;C:Maxdose.图2不同条件下慢性心肌缺血bFGF的表达（略）