病理切片的制作课件

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1、病理切片的制作病理切片的种类1石蜡切片2冰冻切片3震动切片4火棉胶切片5塑料切片病理切片的制作过程冰冻切片石蜡切片火棉胶切片︳↓︳——————————→取材←————————↓固定↓冰冻←————————冲水∣↓∣脱水———————————∣↓↓∣透明乙醚酒精∣↓↓∣浸蜡胶液渗透∣↓↓∣石蜡包埋火棉胶包埋↓↓↓冰冻切片切片切片↓↓↓染色染色染色↓↓↓封固封固封固取材1取材刀具必须锋利。2切取标本不应该挤压和揉擦，不应使用有钩镊子或血管钳等手术器械镊取标本，应选择病变或可疑病变的组织。必要时选取病变与正常组织交界处。3切取标本

2、的原则是求准而不是求量多以不超过15x15mm为佳，厚度以3—5mm为度，4取材要及时，组织块必须争取时间及时固定。组织的固定以愈新鲜愈好。5取材时对大体标本（肉眼标本）绘制图象，进行仔细描述。包括形状、大小，硬度，颜色，病灶（或可疑病变）部位对所取的组织应定位编号。6切取各组织块时，切勿挤压损伤，对典型或具有教学和科研价值的肉眼标本，7不能因取材而对标本造成人为的“病变”。肠粘膜组织上沾有少量粪便，也不应以手拭去或以水洗去。8固定液的量要充足，应为固定组织的10倍。9组织采取应在正常与病灶交界之处。组织形状最好为方形或长方

3、形状，这样有利于制片。切不可以形状定位，组织厚薄要均匀。10各组织块应包括各脏器的重要结构，如肾脏组织包括皮质部分和髓质部分。在有浆膜的脏器（如胃等）组织块中，要至少有一块带有浆膜。11组织内的钙化病灶或骨质，应在充分固定之后进行脱钙，组织内的非病理性异物应予剔除。固定的目的能防止细菌的腐蚀和组织的自溶保存细胞固有的物质，能凝固或沉淀细胞内或组织液，糖元等，使细胞或组织基本上保持与生活时的物质一样。使组织硬化，便于切块。对某些具有传染性的标本，能防止疾病的扩散保存好大体标本。可增强染色的作用。固定剂的种类Ⅰ类：醛类，甲醛，戊

4、二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等。Ⅱ类：氧化剂类，四氧化锇（奥酸），高锰酸钾，重铬酸钾等。Ⅲ类：蛋白变性类，甲醇，乙醇，醋酸等。Ⅳ类：其他，氯化汞，苦味酸等。Ⅴ类：蛋白沉淀，丙酮等。固定剂的选择1、渗透性强2、组织在固定液的作用下，不应发生显著的收缩和膨胀现象。3、固定剂应该有利组织切片和染色，（1）固定剂对固定后的组织应有利于染色剂的染色。(2)固定剂能将组织或细胞中某些必须观察的成分予充分固定而保存下来，以便染色。4、固定液应该同时也是一种较好的保存液。固定的方法浸泡固定法灌流固定法微波固定法蒸汽熏蒸固定法固定注

5、意事项1.组织块不宜过大，一般以厚度5mm，长宽不超过15×15mm。2.固定液的量一般以组织块大小的20倍为宜，3.必须选择渗透力强，又不是组织过度收缩或膨胀的试剂作为固定液。4.固定时间的长短因固定剂的不同要求而定，也与气温、组织块的大小有关。5.特殊要求的组织，常需特殊的固定液，冲洗时应注意以下事项水溶性的固定剂：需用流水冲洗。酒精溶剂的固定剂：应用同浓度的酒精浸洗。含苦味酸的固定剂：（苦味酸与甲醛混合液除外），须用70％酒精浸洗，以免水洗后固定作用消失。含有升汞固定剂：组织经固定后应在冲洗剂－水或酒精中加碘以洗去组织

6、内汞的沉淀。含有铬酸的固定剂：组织在冲洗时最好置于暗处，以免产生沉淀或使组织硬化而影响制片。石蜡切片的制作脱水透明浸蜡包埋脱水目的常用的脱水剂（酒精,丙酮,正丁醇,二氧乙环）脱水的基本原则：从低浓度酒精开始逐渐升到高浓度酒精，以保持组织中的水分完全脱净。透明目的透明剂：常用的有二甲苯，苯，甲苯，氯仿，香柏油等透明时间的长短因组织的大小而异。例如脑组织和有血块的组织，就应该缩短在二甲苯内留置时间，而一些肌肉组织和胃肠组织则应该稍延长在二甲苯内留置时间，最好先投入酒精和透明剂等量混合液半小时，再入透明剂，并更换一次透明剂，待组织

7、完全透明后进行浸蜡，一般需要半小时至2－－3小时。浸蜡概念54－60.C较厚的组织需要较长时间才能使蜡浸入中心，而且厚的组织常带入的透明剂比较多，故需要多次浸蜡才能将透明剂除去。即使少量透明剂也会沾污石蜡而产生结晶，致使切片时切片易碎裂。为了尽可能排除透明剂，浸蜡可以分两级或三级进行。以熔点较低的软石蜡作为第一步，然后再换为熔点较高的石蜡作为第二步，第三步。包埋将脱水、透明、浸蜡以后的组织块用石蜡包埋，制成适当硬度的石蜡块，以便切成薄片。包埋注意事项1新蜡应在温箱内熔化一次，使其中所含的挥发性物质蒸发，以免包埋冷凝时发生“蜡

8、花”，即蜡块中呈不均匀现象，而不能切片；2石蜡凝结过程中，将包埋容器放入水中时动作要慢；3制作切片时，夏天用硬蜡包埋，冬天可用软蜡包埋；软的组织用软蜡，硬的组织用硬蜡。4一般组织常用的包埋蜡熔点52－60℃的石蜡，如果需要切4um以下的切片，则用56－60℃的石蜡，较厚的切片（如胚胎连续切