宫颈腺癌中hpv16-18感染与cox2蛋白表达的关系

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1、宫颈腺癌中HPV16/18感染与COX2蛋白表达的关系：王喜梅,李树平,舒筱灿，吴勇军,孙雷,郑仁恕，湛丽【摘要】　　目的探讨16、18型人乳头瘤病毒（HPV16/18）在宫颈腺癌发生发展中的作用，分析HPV16/18感染与环氧化酶2（COX2）蛋白表达的关系。方法采用组织微阵列技术结合原位杂交和免疫组化(SP法)检测24例慢性宫颈炎和86例宫颈腺癌HPV16/18DNA和COX2蛋白表达情况。结果HPV16/18DNA和COX2蛋白在宫颈腺癌中的阳性表达率分别为65.1%与86.0%，均显著高于慢性宫颈炎组织

2、8.3%与33.3%（P<0.01）。HPV16/18感染与宫颈腺癌的病理分级和组织学类型无关，但与COX2表达呈正相关（P<0.05）。COX2表达与宫颈腺癌的病理分级有关，G3组COX2蛋白阳性表达率明显高于G1组（P<0.05）。COX2表达与宫颈腺癌组织学类型无明显相关性（P＞0.05）。结论宫颈腺癌的发生与HPV16/18感染及COX2蛋白表达异常相关，宫颈腺癌中COX2高表达与HPV16/18感染有一定相关性，二者可能协同作用导致宫颈腺癌恶性发展。【关键词】宫颈腺癌　HPV16/

3、18　COX2　原位杂交；免疫组化　　TheRelationshipbetaKeya;HPV16/18;COX2;Insituhybridization;Immunohistochemistry　人乳头瘤病毒（Humanpapillomavirus,HPV）感染已被公认为是宫颈癌的主要病因，人宫颈癌细胞中表达的HPV瘤基因涉及宫颈上皮的转化和永生，且为增生性病变向恶性演进所必需。与宫颈肿瘤相关的HPV有20余种，其中HPV16/18在宫颈腺癌的检出率明显高于其他类型。环氧化酶2(Cyclooxygenase2,C

4、OX2)是一种诱导型酶，可在多种因子刺激下产生，它与多种肿瘤的细胞增殖、抗细胞凋亡和肿瘤血管形成等密切相关。我们通过自制组织微阵列对24例慢性宫颈炎和86例宫颈腺癌组织进行原位杂交和免疫组化检测，探讨HPV16/18DNA与COX2蛋白表达在宫颈腺癌发生发展中的作用，分析HPV16/18感染与COX2蛋白表达的关系。1资料与方法1.1临床资料选取大连市妇产医院病理科、大连医科大学病理中心及湖南省肿瘤医院病理科1999～2004年保存的宫颈腺癌石蜡标本86例，患者年龄25～72岁，平均52.1岁，全部病例均经病理专家

5、复诊证实并按《诊断外科病理学》标准[1]进行组织学分类和病理分级。组织学类型：宫颈内膜型腺癌52例，子宫内膜样腺癌13例，透明细胞腺癌18例，浆液性乳头状腺癌3例。病理分级：G131例，G233例，G322例。另取24例慢性宫颈炎组织作为正常对照。所有标本经10%甲醛固定，石蜡包埋。1.2组织微阵列制作参照王喜梅等[2]制作方法自制组织微阵列，主要步骤：①用自制打孔针在包埋盒内进行手工单孔制胚，根据实验标本量排成8×6孔数的长方形阵列。②显微镜下观察HE片并在供体石蜡标本上准确圈出取材部位。③用自制取材针在供体蜡块上钻取

6、深约2～3mm的组织条植入已打孔的受体蜡模，置（52±1）℃烤箱内连续烘烤2～3h，使供体组织条与受体蜡模完全融为一体，见图1。④将已制备好的组织微阵列连续4μm厚切片，贴片后于37℃恒温箱中放置12h，常温保存备用。1.3原位杂交HPV16/18原位杂交检测试剂盒（含生物素标记的HPV16/18探针）购自福建泰普生物科学有限公司。杂交/检测主要步骤：切片脱蜡水化；加蛋白酶K，37℃孵育18min；梯度酒精脱水；每张切片加入10μl的生物素化探针，并盖上盖玻片；95℃变性10min；37℃下湿盒中杂交10h；去垢剂洗涤液

7、浸片15min去盖玻片；加SPAP结合物，37℃孵育25min；加酶底物BCIP/NBT室温暗盒显色15min；核固红复染；水性封片剂封片。1.4免疫组化标记免疫组化染色采用SP法。羊抗人COX2单克隆抗体购自北京中杉生物技术有限公司。SP免疫组化试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司，染色步骤参照试剂盒说明书进行。以已知阳性片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。1.5结果判断HPV16/18DNA和COX2蛋白阳性细胞的计数限为宫颈腺癌组织中的肿瘤细胞和慢性宫颈炎组织中具有正常宫颈腺上皮形态特征的细胞。原位杂交以

8、细胞核出现蓝色或黑色颗粒为阳性标记，阳性细胞数＞5%为阳性(+)。免疫组化以细胞质出现棕黄色颗粒为阳性标志，阳性表达根据阳性细胞百分数和着色程度进行半定量结果判定：无阳性细胞0分，阳性细胞数≤25%记1分，26%～50%记2分，51%～75%记3分，≥76%记4分；胞质无着色0分，棕黄1分，棕色2分，棕褐3分；每张切