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1、华支睾吸虫分泌崔香淑，金元哲，李顺玉【关键词】华支睾吸虫；,,分泌-排泄抗原；,,酶连免疫吸附法；,,诊断 摘要：目的评价华支睾吸虫分泌-排泄抗原在华支睾吸虫病血清学诊断中的价值，应用ELISA技术对华支睾吸虫的成虫粗抗原和分泌-排泄抗原的敏感性和特异性进行比较。方法制备华支睾吸虫的粗抗原和分泌-排泄抗原，以ELISA方法对华支睾吸虫感染患者509人、麝猫后睾吸虫感染者47人、卫氏并殖吸虫感染者20人、日本血吸虫感染者14人以及健康人血清163人，检测血清特异性IgG。结果比较华支睾吸虫分泌-排泄抗原的诊断的敏感性高于粗
2、抗原，分泌-排泄抗原的特异性反应明显高于粗抗原。结论分泌-排泄抗原用于诊断感染华支睾吸虫病有较高的敏感性和特异性,是一种有效的诊断抗原。 关键词：华支睾吸虫；分泌-排泄抗原；酶连免疫吸附法；诊断 TheSignificanceofExcretory-secretoryAntigenofClonorchissinensisinSerologicalDiagnosis Abstract：ObjectiveThepresentstudyaninfectedusani(20cases)Schistosomajaponicum
3、(14cases)andserumof163healthystudentsol/L,pH7.2~7.4）冲洗新鲜虫体后,加入等体积的PBS,用漩涡混合器打匀5min,12,000r/min离心30min，收集上清液即为粗抗原。 1.1.2分泌-排泄抗原及虫卵抗原采集新鲜虫体用PBS冲洗3次,置0.01mol/LpH7.2PBS培养液中（内含抗生素）37℃培养15h,收集上清液,4℃3000r/min离心10min, 分离虫卵,并用12000r/min离心30min去除精子,取上清液为分泌－排泄抗原,紫外分光光度计测定蛋白
4、浓度，分装，-20℃保存备用。 1.2待检血清华支睾吸虫感染血清509份取自黑龙江省肇源县。这些感染者均有长期食用生鱼的历史，并粪检阳性。163例健康者血清取自非流行区无病症且粪检阴性者作为阴性对照。其它相关吸虫患者血清作交叉反应实验:麝猫后睾吸虫患者47例，日本血吸虫患者14例，卫氏并殖吸虫患者20例。所有吸虫患者均经寄生虫病原学检测确诊。 1.3ELISA实验将华支睾吸虫不同组织抗原用0.1mol/LNaHCO3缓冲液（pH9.6）稀释成10mg/L,每孔100μl包被96孔聚丙乙烯酶标板，4℃过夜。用含3%脱脂奶
5、粉的PBS-Tin。用PBST洗涤5次,加待测血清（华支睾吸虫，囊虫血清1∶25或卫氏并殖吸虫,裂头蚴血清1:100稀释）100μl,在37℃培养箱孵育60min。用PBST洗涤5次，加（1：50000稀释）辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗人的IgG（USBiochemicalCooperation）100μl,在37℃培养箱孵育60min。PBST洗涤5次,加底物3，3’，4，4’-四甲基联苯胺（TMB）和0.1%H2O2，10min。用酶标仪(MK3型号,芬兰)在450nm处测吸光度。OD值小于0.25为阴性,大于或
6、等于0.25为阳性。 1.4统计学分析所有统计分析均用SPSS10.0统计软件进行，数据用平均数±标准差表示，并进行方差分析。 2结果 结果见表1~3。用粗抗原检测抗体的ELISA法检测各组血清,阴性对照组的平均吸光值较低，为0.066±0.058,且个体间差异较小,华支睾吸虫患者血清的平均吸光值为0.353±0.115,麝猫后睾吸虫患者血清为0.261±0.135,日本血吸虫患者血清为0.093±0.124,卫氏并殖吸虫患者与肝片形吸虫患者血清的平均吸光值稍高于0.1。而用分泌-排泄抗原检测抗体时,对照组血清样本的
7、吸光值和粗抗原检测的吸光值在相似的水平上,华支睾吸虫患者血清的平均吸光值升高到0.404±0.129,而其他吸虫患者血清的吸光值均有所下降。509例华支睾吸虫患者血清，449例在粗抗原检测抗体中为阳性,敏感性为88.2%；471例在分泌-排泄抗原检测时为阳性,敏感性为92.5%,统计学上有显著性差异（P＜0.05）。在粗抗原和分泌-排泄抗原的ELISA检测中,对照组血清和肝片吸虫患者血清均末见交叉反应,但麝猫后睾吸虫患者血清在两种抗原检测中均有较高的交叉反应,日本血吸虫患者及卫氏并殖吸虫患者用粗抗原作检测交叉反应,分别为7
8、.1%（1/14）与25%（5/20）,而用分泌-排泄抗原作检测,均末见交叉反应。分泌-排泄抗原检测抗体的ELISA法特异性显著高于用粗抗原检测抗体的ELISA法（特异性分别为93.1%和87.8%）。 表1华支睾吸虫粗抗原和分泌-排泄抗原吸光度的比较（略） 与对照组比较，*P0.05，**P0.0
