间充质干细胞在人胎盘组织中的染色定位

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1、间充质干细胞在人胎盘组织中的染色定位【】目的探索间充质干细胞(mscs)在人胎盘组织中的分布规律。方法取正常剖宫产之足月健康产妇的新鲜胎盘组织,按中央带、中间带、边缘带、绒毛板层、中间层和基底板层分为9组:aa、ab、ac、ba、bb、bc、ca、cb、cc。连续切片,以抗cd166、抗cd44、抗cd29分别做免疫荧光和免疫组化染色。显微镜下观察阳性细胞分布区域,采用hpias1000彩色病理图像分析系统进行图像分析。结果cd166、cd44、cd29阳性表达细胞的分布情况较一致,主要集中于血管内皮下及血管附近间质内。胎盘中央带中间

2、层(ab)阳性细胞较集中,阳性表达的强度较强,其od值与其它组差异有统计学意义(p0.05)。边缘带阳性细胞稀少,阳性表达的强度较弱。结论胎盘各部位均存在cd166、cd44、cd29阳性表达的细胞,但脐带附着处下方胎盘中间层相对其他部位可能为mscs富集区域。【关键词】间充质干细胞胎盘染色anexperimentalstudymiaozongning,xuqiulan,panyuhong,esenchymalstemcells(mscs)inhumanplacentasbyimmunofluorescencestainingan

3、dimmunohistochemicalstaining.methodsfreshnormaltermplacentaltissuescesareansectionedicalindication,andbasedonthecentralzone(a),theintermediatezone(b),themarginalzone(c),thechorionicplatelayer(a),themiddlelayer(b)andthebasallayer(c),theymunofluorescencestainingandimmunohi

4、stochemicalstainingageanalysissystemainlyconcentratedintheareaundervascularendothelialcellsandinthestromasurroundingthevessel.thereanystronglypositivecellsintheintermediatezoneandthemiddlelayeroftheplacenta(ab)andfearginalzone(c).conclusioncd166,cd44andcd29positivecellsc

5、ouldbefoundineverypositioninhumanplacentas,butainlydistributedintheintermediatezoneandthemiddlelayeroftheplacenta(ab).keyesenchymalstemcells;placenta;location;staining胎盘作为间充质干细胞的新备受关注。.133229.目前国内外对胎盘间充质干细胞(placentaderivedmesenchymalstemcells,pmscs)免疫调节、定向分化的相关研究较多,但缺乏公认

6、的精确的分离和纯化pmscs的方法。本实验取不同部位的胎盘组织,分别作cd166、cd29、cd44免疫荧光染色,观察比较3个标记物的阳性表达情况,旨在了解人胎盘组织中mscs的分布规律。1材料与方法1.1材料1.1.1主要试剂和仪器冰冻切片机购自leica公司,荧光显微镜bx51和数码成像系统dp50购自olympus公司,图像分析系统hpias1000购自新华海公司,鼠抗人单克隆抗体cd44购自exalplabiologicalinc公司,鼠抗人单克隆抗体cd29购自ancell公司,鼠抗人单克隆抗体cd166、羊抗鼠荧光抗体购

7、自bioscience公司,sabc试剂盒、dab显色试剂盒购自迈新公司。1.1.2胎盘组织在产妇知情同意的情况下,经医院伦理委员会批准,获取临床正常剖宫产之足月健康产妇的新鲜胎盘组织,所选择的胎盘脐带附着点均在胎盘中央或稍偏位,大小及重量在正常范围内。1.2方法1.2.1分组将胎盘组织分为中央带即脐带附着处(a)、边缘带即距脐带附着点最远处(c)和中间带即两者之间中点处(b)3大组,每组从胎儿面向母体面再分为绒毛板层(a)、中间层(b)和底板层(c)3小组。1.2.2冰冻切片取aa、ab、ac、ba、bb、bc、ca、cb、cc9处新

8、鲜组织,大小为1cm×1cm×0.3cm,以oct包埋于冻台上,速冻后切5μm薄片,贴附于载玻片。1.2.3石蜡切片取前述9处组织,大小为1cm×1cm×0.3cm,中性福尔马林液中固定24h,梯度酒精溶液