4种方法制备冷沉淀的质量分析

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1、4种方法制备冷沉淀的质量分析苏红曾四海李志黄可君（广州血液中心广东广州510095）【摘要】目的通过分析离心法和虹吸法制备冷沉淀（同批次制备）的质量，选择更加优化的冷沉淀制备方法。方法取同一制备H期的冷沉淀原料血浆，分别采用冷藏融化离心法、水浴融化离心法（两种温度条件）、水浴融化虹吸法制备冷沉淀，分别按照机械抽样法抽样样品，检测冷沉淀中FVIII含量并进行统计分析。结果4°C冷藏融化离心法的FVIII含量为65.17±27.39（IU/袋），合格率为40%（8/20）;4°C水浴融化离心法的FVU1含量为89.67±3

2、9.96（IU/袋），合格率为60%（12/20）;2°C水浴融化离心法的FVIII含量为84.33±30.57（IU/袋），合格率为：55%（11/20）；4°C水浴融化虹吸法FVDI含量为108.85±42.41（IU/袋），合格率为83.3%（25/30）。经单因素方差分析，4°C水浴融化虹吸法的质量水平明显优于其他三种方法。结论水浴融化虹吸法制备冷沉淀操作简便、快捷，FVIII合格率高，明显优于冷藏融化离心法和水浴融化离心法，值得推广应用。【关键词】冷沉淀凝血因子VIII【中图分类号】R197.38【文献标识码

3、】A【文章编号】1672-5085（2013）36-0061-02冷沉淀是采用特定的方法将保存期内的新鲜冰冻血浆（freshfrozenplasma,FFP）在1°C〜6°C融化后，分离出大部分的血浆，并将剩余的冷不溶解物质在1小时内速冻成固态的成分血［1］。根据冷沉淀在低温条件下不融化的特性，可制定不同的制备方法，目前血站常用的制备方法主要有：离心法，原料血浆放置于4±2°C冰箱或在4±2°C恒温水浴箱中融化，待基木融化后，在4±2°C重离心，分离出上层血浆，剩下少量血浆和沉淀物，制成冷沉淀；虹吸法，在

4、4&plUSmn;2°C恒温循环解冻箱中放入原料血浆，转移空袋置于箱体外低位，松开止血夹，启动循环水流和震荡摇摆，血浆融化过程中，随时被虹吸至转移空袋中，当融化至剩下约少量血浆与沉淀物时，闭合导管，阻断虹吸，定量，制成冷沉淀［2］。本文旨在利用同一批原料血浆使用不同的制备方法制备冷沉淀，通过分析凝血因子VIII的质量水平，选择更高效的冷沉淀制备方法。i.材料与方法L1冷沉淀原料血浆本中心体检采血科采集的400ml四联袋全血，要求在采血后6小吋之内制备并冻结成固态且各项检测合格的新鲜冰冻血浆。1.2仪器设备美国SORVALLRC-12BP大容量冷冻

5、离心机，费森尤斯CompomatG4血液分离机，低温操作台，-20°C低温冰箱，4°C贮血冰箱，恒温循环解冻箱，MBF21平板速冻机1.3制备冷沉淀的方法1.3.1冷藏融化离心法（A组）将40份原料血浆置于4°C贮血冰箱中过夜（10-l2h）,待其融化到剩下少量冰碴吋取出，在己预温的离心机中离心（4°C、4000g、8min）,分离出上层血浆，下层剩下约30ml带小量冰磕或絮状物的糊状液体，定量，热合封口后将冷沉淀迅速置于平板速冻机内冻结成固态。1.3.2水浴融化离心法（B组、C组）将血浆轻放入己预热的恒温循环解冻箱中（温度分别设定为2°C及4°

6、C），血浆按照错位排列的方式放入，每个恒温循环解冻箱中放入30袋，启动循环水流和震荡摇摆，盖上箱盖。待其融化到剩下少量冰碴吋取出并尽快装杯并配平，在已预降温的离心机中离心（4°C、4000g、8min）,分离出上层血浆，下层剩下约30ml带小量冰碴或絮状物的糊状液体，定量，热合封口后将冷沉淀迅速置于平板速冻机内冻结成固态。血浆融化需吋100-110min（2°C水温）或75-80min（4°C水温）。1.3.3水浴融化虹吸法（D组、D1组、D2组）将血浆轻放入己预热的恒温循环解冻箱中（温度设定为4°C）,血浆按照错位排列的方式放入，每个恒温循环解

7、冻箱中放入30袋，转移空袋置于箱体外低位，松开止血夹，启动循环水流和震荡摇摆，盖上箱盖。血浆融化过程中，随时被虹吸至转移空袋中。当融化至剩下约30ml血浆与沉淀物时，闭合导管，阻断虹吸，定量，热合封口后将冷沉淀迅速置于平板速冻机内冻结成固态。血浆融化需吋50-60min。1.3.4质量标准由200mlFFP制备的冷沉淀：FVIII含量≥80IU/袋［1］。1.4抽样采用机械抽样法，在成品中取得A组、B组、C组（各20份）和D组、D1组、D2组（各10份）样品。1.5凝血因子VUI检测采用BECKMANCOULTER血凝仪（ACL7000）检

8、测。1.6统计学处理采用SPSS18.0对数据进行单因素方差分析及t检验处理。2.结果2.14种方法制备冷沉淀的FVUI含量见表1。表1