微生物标准操作规程三9

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1、XXX人民医院检验科微生物室标准操作文件文件编号：JY-WSW-SOP-007版本号：2007第1次修改编写者：XXXXXX审核者：XXX修订日期：2012年1月15日页码：第1页共2页霍乱弧菌检验标准操作规程1．概述霍乱弧菌可分为古典生物型和EL-Tor生物型；根据菌体抗原(即O抗原)又可分为155个血清群，其中O1血清群和O139血清群能引起霍乱的发病和流行，是霍乱的病原菌。2．标本类型粪便标本。3．鉴定3.1形态与染色革兰阴性，菌体弯曲呈弧形或逗点状。3.2培养特性在TCBS琼脂平板上呈黄色的菌落。在双氢链霉素洗

2、衣粉琼脂平板上形成中心呈灰褐色的菌落。3.3生化反应氧化酶试验阳性；发酵葡萄糖、蔗糖、甘露醇，不发酵乳糖和L阿拉伯糖；动力、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、霍乱红、硝酸盐还原和黏丝试验均阳性；精氨酸双水解酶试验阴性。3.4鉴别要点3.4.1与气单胞菌属、邻单胞菌属的鉴别见表5—41。表5—41弧菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属鉴别的关键性试验试验霍乱弧菌拟态弧菌气单胞菌属邻单胞菌属O/129敏感试验（150ug）SRS氨苄西林（10ug）SRR黏丝试验+--肌醇--+精氨酸-++注：“+”为90％以上菌株阳性，“一”为90％以

3、上菌株阴性，“s”为敏感，“R”为耐药3.4.2确诊O1群霍乱弧菌必须具备的条件①涂片为革兰阴性弧菌或杆菌。②TCBS等选择培养基上典型的菌落特征。③动力试验阳性，符合生化特性。④O1群霍乱弧菌诊断血清凝集试验阳性。3.5操作步骤35.1在碱性蛋白胨水(pH8.6)中，37℃培养6～8小时后转种TCBS平板。3.5.2玻片凝集试验从TCBS琼脂平板或双氢链霉素洗衣粉琼脂平板上挑取可疑菌落，与霍乱多价诊断血清做玻片凝集试验，以生理盐水做阴性对照，诊断血清凝集、生理盐水不凝者为阳性。做初步鉴定试验后，将此高度怀疑菌送疾病预

4、防控制中心(CDC)做最后鉴定。4．药敏参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSIM100一$20最新版本文件。5．质量控制见《质量管理程序》。6．检验结果解释与分析初次分离时采用pH8.6的碱性蛋白胨水增菌，6～8小时，液体呈均匀混浊，表面形成菌膜。根据O1群菌其O抗原中的ABC因子，又可进一步将其分为小川(AB)、稻叶(AC)和彦岛(ABC)等3个血清型；还可根据其产毒基因的有无和对人的侵袭力，划分为流行株和非流行株，流行株才是霍乱真正的病原菌。部分菌株不被O1群霍乱弧菌多价血清所凝集，称之为非O1群霍乱弧菌，以

5、往也称不凝集弧菌或不凝集霍乱弧菌。7．临床意义霍乱弧菌是烈性肠道传染病霍乱的病原菌，该菌能产生霍乱肠毒素，作用于小肠黏膜，引起肠液大量分泌，表现为严重腹泻(米泔水样便)、呕吐、脱水和酸中毒，病死率很高。8．鉴定流程4．药敏参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSIM100一$20最新版本文件。5．质量控制见《质量管理程序》。6．检验结果解释与分析初次分离时采用pH8.6的碱性蛋白胨水增菌，6～8小时，液体呈均匀混浊，表面形成菌膜。根据O1群菌其O抗原中的ABC因子，又可进一步将其分为小川(AB)、稻叶(AC)和彦岛(

6、ABC)等3个血清型；还可根据其产毒基因的有无和对人的侵袭力，划分为流行株和非流行株，流行株才是霍乱真正的病原菌。部分菌株不被O1群霍乱弧菌多价血清所凝集，称之为非O1群霍乱弧菌，以往也称不凝集弧菌或不凝集霍乱弧菌。7．临床意义霍乱弧菌是烈性肠道传染病霍乱的病原菌，该菌能产生霍乱肠毒素，作用于小肠黏膜，引起肠液大量分泌，表现为严重腹泻(米泔水样便)、呕吐、脱水和酸中毒，病死率很高。8．鉴定流程粪便增菌培养（碱性胨水）TCBS或其他选择平板玻片凝聚阳性，盐水对照不凝聚初步报告送CDC最后鉴定快速诊断参考文献