木菠萝水提物中多糖含量的测定

《木菠萝水提物中多糖含量的测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、木菠萝水提物中多糖含量的测定【关键词】木菠萝多糖类苯酚—硫酸法　　木菠萝又称“菠萝蜜”、“树菠萝”(Artocapusheterophyllus.Lam)，属桑科乔木树种，原产于印度和马来西亚，有“热带水果之王”美称［1,2］。木菠萝果肉爽脆，蜜甜，含有丰富的糖、蛋白质和微量元素，成熟果芳香味浓，香气独特，肉色橙黄鲜艳，营养价值很高［1］，研究表明木菠萝多糖在医药、食品方面均有很好的应用前景和开发价值［1］。木菠萝叶合剂，具有清热解毒、防腐止痒、杀菌收敛的作用，对山羊传染性脓疱口膜炎，对马、牛、猪、羊、犬的湿疹

2、，都有很明显治疗效果［3］。而有关木菠萝多糖方面的研究较少，目前测定木菠萝多糖含量的方法未见报道，鉴于木菠萝多糖所具有的增强免疫力、抗肿瘤、抗病毒以及抗衰老等特殊生物活性，对木菠萝这一名贵植物的多糖类物质有待于进一步开发与利用。因此，笔者采取苯酚—硫酸法对木菠萝多糖含量进行测定，为木菠萝新药和食品的开发奠定基础，以期为进一步开发利用木菠萝多糖提供科学依据。　　1仪器与试剂　　　　UV-755B型紫外可见分光光度计：上海分析仪器总厂；电子天平:上海精科天平；电热恒温鼓风干燥箱：上海精宏实验设备有限公司。　　　　木

3、菠萝为广西百色市右江区木菠萝湿包类型的干燥成熟果实；葡萄糖对照品：上海化学试剂有限公司；95％乙醇、浓硫酸、苯酚、三氯甲烷、正丁醇、石油醚、丙酮、乙醚等其他试剂均为分析纯。　　2实验方法　　2.1木菠萝多糖提取工艺［4］　　　　木菠萝去核、取湿包于60℃下真空干燥，称取干燥的木菠萝约12.0g，粉碎后，用热水浸提，抽滤，合并滤液并进行减压浓缩。在浓缩液中加入2倍体积的石油醚脱脂2次，滤出溶剂，残渣风干，以80%乙醇回流2次，每次3h。回收乙醇，将浓缩液置于250ml三角瓶中，加入浓缩液5倍体积的氯仿—正丁醇［V

4、(氯仿)∶V(正丁醇)=4∶1］混合液，振摇10min，在4000r/min离心10min，分离除去沉淀，以上步骤重复5次以除去游离蛋白质。上清液以5倍体积95%乙醇沉淀2次，抽滤，固形物依次以丙酮、乙醚、无水乙醇洗涤，得木菠萝粗多糖置真空干燥，备用。　　2.2苯酚溶液的配制　　称取苯酚100g，加铝片0.1g和碳酸氢钠0.05g，常压蒸馏，收集182℃馏分，精密称取该馏分15.00g，置于250ml棕色容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度(6％苯酚溶液)，摇匀，放入冰箱中备用。　　2.3葡萄糖标准溶液的配制　　

5、精密称取105℃烘干至恒质量的葡萄糖100mg，加蒸馏水溶解，定容至100ml，得到浓度为1mg/ml的葡萄糖标准溶液。　　2.4最大吸收波长的选择［5］　　精密量取1mg/ml葡萄糖标准溶液0.2ml置于10ml具塞试管中，加入6％苯酚1.4ml，迅速加入浓硫酸7.0ml，混匀，放置5min，置沸水浴中加热15min，取出后置冷水中冷却15min。并用蒸馏水配成20ml溶液，以蒸馏水为空白对照，于380～600nm波长范围内测定吸收度，测得葡萄糖的最大吸收波长为495nm。　　2.5正交法选择显色条件［5］　

6、　以显色剂6％苯酚用量、硫酸用量及反应时间为参考因素，每个因素各取3个水平，按L9(33)正交设计法确定最佳的显色条件，因素与水平见表1。表1L9(33)正交实验因素水平（略）　　2.6标准曲线的绘制［5］　　　精密吸取1mg/ml标准葡萄糖溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml，在最大吸收波长下用2.4所述方法测定各组溶液的吸光度A，以葡萄糖浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线，并进行回归处理。　　2.7换算因子的测定　　精确称取干燥恒重的木菠萝多糖10.0mg，定容于

7、50ml容量瓶，精密吸取一定量的提取液稀释一定倍数后按2.4所述方法精密吸取此溶液置于20ml具塞试管中，测定吸光度，并按下式计算换算因子。　　换算因子f=m/C　　式中：m为称取多糖的质量（mg），C为多糖液中葡萄糖的含量（mg/ml）。　　2.8样品中木菠萝多糖含量的测定　　2.8.1样品溶液的制备　　精密称取干燥的木菠萝粉末6.00g，加水80ml，800C水浴提取1.5h，过滤，合并两次滤液，浓缩，冷冻干燥，得棕红色木菠萝水提物样品固型物5.15g。加体积分数80％乙醇50ml，于80℃回流提取0.5h

8、，趁热过滤，重复3次，得滤渣，加丙酮—石油醚(体积比1∶1)混合液50ml脱色0.5h，过滤，滤渣烘干，得灰白色样品粉末0.3320g，精确称取灰白粉末20.0mg，加水定容至50ml，得样品溶液。　　2.8.2样品溶液中木菠萝多糖的含量测定　　精密吸取一定量的2.8.1所得的样品溶液直于20ml具塞试管中，按照2.4的方法测定吸光度，由回归方程计算供试液中葡萄糖含量，按下式计算样品中