临床基因扩增检验实验室的设置质量管理课件

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1、临床基因扩增检验实验室的设置、质量管理体系的建立及其技术验收云南省临床检验中心杜廷义2007，12，20题外话：不参加实习课……？参加实习课……？对相关管理文件的理解：临床基因扩增检验实验室管理暂行办法临床基因扩增检验实验室基本设置标准（第六条）临床基因扩增检验实验室工作规范（第十条、第十三条、第十四条）临床实验室必须遵循的管理办法及其它行业标准强调：污染的控制：预防为主质量保证污染的途径：实验材料试剂每一成分设备的每一部位每一操作步骤污染的判断：经验：全阳性，CT值>35；标准品的CT值发生波动阴性质控阳性阳性率异常增高轻微污染和非特异性扩增？污染和非特

2、异性扩增:目的基因过程控制反应体系（引物、模版、酶、镁离子、退火、循环）条件优化控制的手段：工作区的严格划分SOP的制订和严格执行去污染措施的常规采用污染的监测：阴性质控的设置：阴性血清样本以水为模拟标本仅含扩增反应液（加鉴别实验室是否污染的空白管)质控品的位置标准品－空白－阳性质控－阴性质控－临床样本标准品－空白－阳性质控－临床样本－阴性质控实验室的设置管理要求：设置标准和工作规范具体落实：实事求是、因地制宜设置标准和工作规范“原则上分为四个分隔的工作区；……各区必须有明确的标记……”“每一区域都须有专用的仪器……；不同的工作区应使用不同颜色或有明显区别

3、标志的工作服……；离开工作区时，不得将各区特定的工作服带出……”“……，可在开展临床标本检测前对提取方法进行评价”“……，本区如采用副压条件或减压情况下可减少扩增产物从本区扩散至前区的可能性。理想的设置缓冲间缓冲间扩增区试剂准备区样本制备区产物分析区空气流向空气流向空气流向缓冲间专用走廊工作流向磁性连锁装置现实的问题是：建筑结构通道、门水电供应采光、通风基本的要求:四个区域必须是相互独立的各区的仪器设备及各种物品必须是专用的各区间不能直通，应有缓冲间，供换工作服及鞋子用产物分析区应安装排风扇或其它抽风装置。扩增区试剂准备区样本制备区产物检测区其它实验室走廊

4、实例：其它实验室样本制备区扩增区试剂准备区产品检测区走廊实例：实例：产物检测区扩增区样本制备区其它实验室休息区试剂准备区扩增区产物检测区走廊模板加样区实例：样本处理区实例：小结：处理原则的核心是通过合理的设置解决好临床PCR检测实际运作动态过程中可能发生的污染的预防问题因此，实验室的设计必须充分考虑到对污染来源和污染途径的预防和控制实验室各区的功能和配置：试剂储存和准备区储存试剂的制备试剂的分装主反应混合液的制备冰箱混匀器微量加样器可移动紫外灯专用工作服和工作鞋消耗品（带滤心吸头、离心管、一次性手套等）专用办公用品等。标本制备区：临床标本的保存核酸提取、储

5、存及其加入至扩增反应管测定RNA时cDNA的合成不得在本区对样本进行PCR扩增冰箱(2~8℃和-20℃或-80℃)高速台式冷冻离心机水浴箱和/或加热模块生物安全柜混匀器微量加样器可移动紫外灯专用工作服和工作鞋专用消耗品专用办公用品等扩增区：DNA或cDNA扩增已制备的DNA模板和合成的cDNA的加入主反应混合液制备成反应混合液如果空间允许的话，模板的加入也可以在一个独立的空间内完成核酸扩增仪微量加样器(视情况定)可移动紫外灯专用工作服和工作鞋专用消耗品专用办公用品等产物分析区：扩增片段的测定最主要的扩增产物污染来源有可能使用致突变和有毒物质微量加样器可移动

6、紫外灯专用工作服和工作鞋专用消耗品专用办公用品等辅助用房：清洁区标本接受区：灵活设置不干扰四区规范的保存和传递实验室使用和管理：标本接受区样本制备区扩增区产物分析区试剂准备区区域的适当合并：“由于测定技术总是在发展之中，区域的合并应根据仪器的特点而定”小结：从核心仪器特点、实验室的现状出发，综合考虑管理要求尽可能在现有条件下满足管理要求以管理措施弥补硬件的不足有条件，留有余地再好的分区设置，如果不辅之与认真执行的相应的管理制度，等同于无。实验室质量体系的建立：管理要求体系建立管理要求：1实验室设置和设备1.1实验室原则上应分为四个区，但如使用全自动扩增检测

7、仪，区域可适当合并。1.2各工作区的明确标记1.3实验室设置应能有效地防止PCR后区产物的污染。……管理要求：2设施和环境2.1实验室的设施、工作区域、能源、照明、温控、通风等。应便于检测工作的正常进行。2.2实验室应配备温度湿度计、稳压电源等。2.3进入和使用实验室各区域应有明确的限制和控制。2.4应有实验室清洁、消毒制度及相应用具；2.5实验室应有有关生物污染物处理、生物防护等措施及相应用具；管理要求：3人员3.1实验室应配备足够数量的人员；这些人员必须经过培训，并取得上岗证；3.2实验室应有培训计划和措施，保证其技术人员得到及时培训。3.3实验室应保

8、存其技术人员有关资格证书（如上岗证）、培训、技能和经历等技术档案。