水处理微生物学实验讲义(2015)

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1、水处理微生物学实验讲义环境微生物学实验室规则环境微生物学实验的对象大多是微生物，因此必须严格贯彻“无菌观念”，防止实验中自身感染和环境污染是微生物学实验室的最重要原则。一、每次实验前必须对实验内容进行充分预习，以了解实验目的、原理和方法，做到心中有数，思路清楚。二、在实验室内应保持安静、整洁、有秩序，不得高声谈笑，随便走动或拆卸仪器、搬弄标本。三、实验室内严禁吸烟、进食、饮水，严禁用嘴吸移液及润湿标签，尽量不要用手触摸头面部及身体其他暴露部位。四、实验时小心仔细，全部操作应严格按照操作规程进行。如遇不慎

2、而打破菌种管或使有菌材料污染皮肤、衣物、桌面等情况，应立即报告指导教师，切勿隐瞒或自行处理。五、实验过程中，切勿将乙醇、乙醚、丙酮等易燃药品接近火焰。如遇火险，应先关掉火源，再用湿布或沙土掩盖灭火。必要时使用灭火器。六、被污染过且需要回收的吸管、滴管、试管、玻片等物应用完后立即投入已准备的消毒液中，不得放在桌面上或水槽内。七、爱护公物，节约试剂材料，不得将实验室任何物品私自带走。如遇仪器、用品损坏，应报告指导教师并按规定予以赔偿。八、认真、及时做好实验记录，对于当时不能得到结果而需要连续观察的实验，则需

3、记下每次观察的现象和结果，以便分析。九、每次实验的结果，应以实事求是的科学态度填入实验报告，力求简明准确，认真回答思考题，及时上交教师批改。十、实验完毕，整理桌面，值日生打扫室内卫生，最后离开的同学应注意关好水电、门窗，洗手后离室。实验一、微生物培养基的制备一、目的要求1、明确培养基的配置原理。2、通过对基础培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物

4、质，所以可供作微生物生长繁殖之用。基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCl提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂，琼脂在常用浓度下96℃时溶化，实际应用时，一般在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。由于这种培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。高氏Ι号培养基是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培

5、养基。如果加入适量的抗菌药物（如各种抗生素、酚等），则可用来分离各种放线菌。此合成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的无机盐，这些无机盐可能相互作用而产生沉淀。如高氏Ι号培养基中的磷酸盐和镁盐相互混合时易产生沉淀，因此在混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要将二种或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。此外，合成培养基有的还要补加微量元素，如高氏Ι号培养基中的FeSO4.7H2O的量只有0.001％，因此在配制培养基时需预先配成高浓度的贮备液，然后再按需加入一定的量到培养

6、基中。三、器材1、溶液或试剂可溶性淀粉，蔗糖，牛肉膏，蛋白胨，NaCl，KNO3，K2HPO4.3H2O，MgSO4.7H2O，FeSO4.7H2O，琼脂，1mol/LNaOH，1mol/LHCl。2、仪器或其他用具试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH5.5～9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。四、操作步骤（一）牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）：牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g水1000mlpH7.4~7.61、称量按培养基配

7、方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。2、溶化在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后在石棉网上加热使其溶解，或在磁力搅拌器上加热溶解。将药品完全溶解后，补充水到所

8、需的总体积，如果配制固体培养基时，将称好的琼脂放入已溶的药品中，在加热溶化，最后补足所损失的水分。在制备用三角瓶盛固体培养基时，一般也可先将一定量的液体培养基分装于三角瓶中，然后按1.5％～2.0％的量将琼脂直接分别加入各三角瓶中，不必加热溶化，而是灭菌和加热溶化同时进行，节省时间。在琼脂溶化过程中，应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出容器。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦。配制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基中，影响细